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追梦草

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物的A260/A280很低是怎么回事?

请教各位高手,我做PCR扩增出大小正确的条带,测得浓度为121.1ng/ul,A260/A280为0.96,260/230为0.30,这是怎么回事?A260/A280不应该在1.8左右吗?260/230不应该在2.0左右吗?
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yuhanjie0205

银虫 (小有名气)

应该是纯化上出了问题,酚氯仿抽提的吗?
2楼2013-08-05 23:08:56
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追梦草

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yuhanjie0205 at 2013-08-05 23:08:56
应该是纯化上出了问题,酚氯仿抽提的吗?

多谢啦!我是PCR产物直接测的浓度。。。我刚想明白了,可能是因为还剩余大量dNTPs的原因,导致A260/A280比较低;还有Buffer中各种离子和酶等导致260/230比较低。
3楼2013-08-05 23:26:34
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孤独的寻梦人

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:08:11
A260/A280测的是核酸的吸收值,剩余的dNTPs不会导致测量值降低的 相反应该增加
4楼2013-10-04 23:26:51
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR体系里面有酶。
5楼2013-10-05 23:47:32
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

5楼说的对,有酶的原因,酶是蛋白。
思路决定出路。。。
6楼2013-10-06 09:37:19
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正如5楼说的,A260/A280偏低是因为体系中含有酶,酶是蛋白。而260/230为0.30,这个数值并不影响所测的结果,大可不看
发展才是硬道理!
7楼2013-10-06 15:26:27
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