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追梦草

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物的A260/A280很低是怎么回事？

请教各位高手，我做PCR扩增出大小正确的条带，测得浓度为121.1ng/ul，A260/A280为0.96，260/230为0.30，这是怎么回事？A260/A280不应该在1.8左右吗？260/230不应该在2.0左右吗？
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1楼 2013-08-05 22:00:59
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yuhanjie0205

银虫 (小有名气)
应该是纯化上出了问题，酚氯仿抽提的吗？
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2楼2013-08-05 23:08:56
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追梦草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuhanjie0205 at 2013-08-05 23:08:56
应该是纯化上出了问题，酚氯仿抽提的吗？

多谢啦！我是PCR产物直接测的浓度。。。我刚想明白了，可能是因为还剩余大量dNTPs的原因，导致A260/A280比较低；还有Buffer中各种离子和酶等导致260/230比较低。
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3楼2013-08-05 23:26:34
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孤独的寻梦人

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-06 02:08:11
A260/A280测的是核酸的吸收值，剩余的dNTPs不会导致测量值降低的 相反应该增加
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4楼2013-10-04 23:26:51
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR体系里面有酶。
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5楼2013-10-05 23:47:32
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
5楼说的对，有酶的原因，酶是蛋白。
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思路决定出路。。。
6楼2013-10-06 09:37:19
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正如5楼说的，A260/A280偏低是因为体系中含有酶，酶是蛋白。而260/230为0.30，这个数值并不影响所测的结果，大可不看
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发展才是硬道理！
7楼2013-10-06 15:26:27
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