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lhl2225

金虫 (正式写手)

[求助] 求长片段(7.5 kb)PCR扩增方法? 已有2人参与

目前手头有个工作,需要克隆一个基因的全长。
模板已经过测序,是没有问题的。

遇到问题:
1. 两端设计引物,试了LA taq,KOD,Taq等P不出来。
2.中间设计引物分段P,也P不出来。
3.直接在中间设计两条引物,随便P一段也P不出来。

急!!!

求高人指点!如果根据您的建议P出来了,将赠送100金币酬谢。
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simojie

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. rTaq肯定没有LA-Taq效果好;
厚积薄发
9楼2013-08-06 17:36:38
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板的浓度? 加的量呢?引物的量?酶的量?
你P不出来的胶图是什么样子的?
2楼2013-08-01 19:03:39
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从模板、引物、反应条件等方面找原因
3楼2013-08-01 19:27:55
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lhl2225

金虫 (正式写手)

20μL体系:
ddH2O: 14.5 μL
buffer:2
dNTP(2.5mM each):1.6
F (10uM):0.5
R(10uM):0.5
模板:20 ng
rTaq:0.4

P不出来就是只见引物二聚体,无目的条带!
DMSO:0.2
我想做到的一定能成功!自信不是简单地渴望别人认可你,你要在内心深处觉得,我可以。这样就不用理会别人的怀疑或轻视。
4楼2013-08-01 19:34:13
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