24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2489  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

duke188

新虫 (初入文坛)

[求助] 梯度PCR退火温度

上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)
Tm(1M Na+):68.2
Tm(50mM Na+):46.6
下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)
Tm(1M Na+):66.2
Tm(50mM Na+):44.6
顺便问下大家,Tm(1M Na+)和Tm(50mM Na+)有什么区别啊?
我该选择哪个Tm啊?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
eurofins给出你的引物Tm分别为57.3和55.3,所以我建议你用52 - 55°。我通常都是这么整的,应该没问题的
越学越无知
6楼2013-07-22 18:31:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

shangrila911

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
duke188(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-21 23:05:54
Tm(1M Na+)和Tm(50mM Na+)  括号里面的表示盐浓度,盐浓度越高,Tm越高,不过还是根据自己的实际PCR情况而定,一般PCR常用Tm(50mM Na+)作参考...
一切都会好的!
2楼2013-07-21 22:01:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duke188

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shangrila911 at 2013-07-21 22:01:11
Tm(1M Na+)和Tm(50mM Na+)  括号里面的表示盐浓度,盐浓度越高,Tm越高,不过还是根据自己的实际PCR情况而定,一般PCR常用Tm(50mM Na+)作参考...

我是新手,由于要做梯度PCR摸退火温度,按照Tm(50mM Na+)--5℃的话,退火温度是不是太低了
3楼2013-07-21 22:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-22 11:49:07
引用回帖:
3楼: Originally posted by duke188 at 2013-07-21 22:20:52
我是新手,由于要做梯度PCR摸退火温度,按照Tm(50mM Na+)--5℃的话,退火温度是不是太低了...

一般PCR时的退火温度很少选在50°C以下。从你的引物大概是20nt,GC含量在50%左右,退火温度一般在55-60°C。你可以根据这个设计你的温度梯度。
4楼2013-07-22 04:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +11 河南农业大学-能 2026-04-14 11/550 2026-04-15 15:03 by 学员JpLReM
[考研] 310求调剂 +16 666真好 2026-04-11 18/900 2026-04-15 13:28 by 黑科技矿业
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所,有机化学356分找调剂 +12 Nadiums 2026-04-09 13/650 2026-04-14 17:54 by lhj2009
[考研] 化学070300 求调剂 +23 哈哈哈^_^ 2026-04-12 23/1150 2026-04-14 16:30 by zhouxiaoyu
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 求调剂 +20 MAX怅惘 2026-04-09 22/1100 2026-04-14 14:57 by 独醉梦孤城
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 求调剂288 +7 ioodiiij 2026-04-10 9/450 2026-04-13 08:33 by Hayaay
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 277 数一104,学硕,求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:57 by zhq0425
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
信息提示
请填处理意见