应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 转化长不出来菌
141/2返回列表12下一页
查看: 3696  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hb467116237

金虫 (小有名气)

[求助] 转化长不出来菌

微生物的虫虫们看过来 ，帮我解决下这个问题：我构建的载体大小在16~17kb之间，转ET12567/pUZ8002，重复了好几次都长不出菌来。用的质粒量分别有2、5、10微，是钙转的感受态。不知道什么原因，这步做不出来，实验就没法进行了，捉急啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-18 09:41:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hb467116237

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by pangenlaozhu at 2013-07-29 13:47:03
感受态细胞有没有问题，可以买点市售的，如果不是用大肠，那么热激的条件应该要调整吧，还有平板抗生素的浓度，质粒片段的大小都是有影响的，祝你实验顺利。

谢谢，后来实验做出来了 ，可能片段大小有点大，加上使用了三种抗生素，所以转化效率有点低，菌长得少而且时间长。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-07-29 19:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hb467116237: 金币+2 2013-07-18 12:33:11
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-07-18 16:48:42
大载体用电转化比较好，熱激对大片段的效率比较低。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-18 10:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hb467116237

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-18 10:09:05
大载体用电转化比较好，熱激对大片段的效率比较低。

我试试看，谢了
回复此楼
3楼2013-07-18 12:32:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风之游魂

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你用的是什么菌株？有些菌株因为本身细胞壁厚度问题就很难转化，比如枯草芽孢杆菌，得用特殊的方法
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-19 08:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hb467116237

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 风之游魂 at 2013-07-19 08:45:45
不知道你用的是什么菌株？有些菌株因为本身细胞壁厚度问题就很难转化，比如枯草芽孢杆菌，得用特殊的方法

我是以pOJ446克隆出来一个载体，连有tsr的抗性基因，后边要做大片段缺失。
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-19 10:22:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hb467116237

金虫 (小有名气)
还有一点是我用了三种抗生素，那么生长的时间是不是会长一些，约17h左右。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-20 09:53:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

499649610

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hb467116237: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-22 10:45:59
转化平板 采用的抗生素浓度比较低（但能够抑制野生型时），会有较高的转化效率，相当于一个诱导表达的过程！ 其次，不知道你是转到什么菌种，有的菌 会自己形成一层膜，感受态细胞很难制作，因而也就很难转进去。 还有就是，有的菌自带某些内切酶修饰系统，有文献说 有些菌转化时，把质粒先甲基化会更好，但不知到对后续试验是否有影响！
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-20 15:47:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hb467116237

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-20 15:47:33
转化平板 采用的抗生素浓度比较低（但能够抑制野生型时），会有较高的转化效率，相当于一个诱导表达的过程！ 其次，不知道你是转到什么菌种，有的菌 会自己形成一层膜，感受态细胞很难制作，因而也就很难转进去。 还 ...

我是用pOJ446构建的载体，后边要做大片段缺失。感受态细胞是ET12567，以前转pIB139的时候效率很高，同样是使用了三种抗生素，但是不知道这次为什么这么低
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-22 10:49:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pangenlaozhu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
hb467116237: 金币+1 2013-07-29 19:31:57
感受态细胞有没有问题，可以买点市售的，如果不是用大肠，那么热激的条件应该要调整吧，还有平板抗生素的浓度，质粒片段的大小都是有影响的，祝你实验顺利。
赞一下 回复此楼
选择比努力重要
9楼2013-07-29 13:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hb467116237 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 9/450 2026-08-23 10:59 by Tide man
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭