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油菜小农

银虫 (小有名气)

你好,我是南农大的。正准备做大肠杆菌-链霉菌的接合转移,不知道你现在有没有大肠杆菌大肠ET12567(pUZ8002),如果有能否提供?急需!谢谢
11楼2014-04-28 17:59:32
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helongxia

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by hb467116237 at 2013-07-29 19:31:23
谢谢,后来实验做出来了 ,可能片段大小有点大,加上使用了三种抗生素,所以转化效率有点低,菌长得少而且时间长。...

我们一直做15kb的质粒,但是转化后总是没有目的菌,感觉是转化不成功,以下是我们的转化步骤:1.融解感受态,加入1ul质粒,轻弹后冰浴30min。2.热激42度,90s,再冰浴2min。3.加入900ul无抗性的LB培养基,37度摇床220rpm,1h。4、13000rpm,4度离心5min,去上清700ul,混匀剩余300ul涂板,37度过夜。不知楼主的转化步骤是怎么样的,或者哪些步骤优化了,希望能告知,谢谢!
12楼2015-02-08 01:33:01
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惰惰228

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by hb467116237 at 2013-07-29 19:31:23
谢谢,后来实验做出来了 ,可能片段大小有点大,加上使用了三种抗生素,所以转化效率有点低,菌长得少而且时间长。...

请问,你的菌用了多久长出来的?后面接着做接转了吧,这一步长得慢对后面没啥影响吧?自己也在做,这一步转化长了两三天才出来呢,不知道正常否,想看看你用了多久。谢谢!
原来你也在这里
13楼2016-08-24 03:49:01
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yz521

新虫 (初入文坛)

你好,我最近也在做ET12567的转化,我的质量粒大概40kb,转了很多次都转不进去。。。请问您最后是怎么转化成功的呢
14楼2018-04-25 16:31:07
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