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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 转化长不出来菌
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油菜小农

银虫 (小有名气)
你好，我是南农大的。正准备做大肠杆菌-链霉菌的接合转移，不知道你现在有没有大肠杆菌大肠ET12567(pUZ8002)，如果有能否提供？急需！谢谢
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11楼2014-04-28 17:59:32
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helongxia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hb467116237 at 2013-07-29 19:31:23
谢谢，后来实验做出来了 ，可能片段大小有点大，加上使用了三种抗生素，所以转化效率有点低，菌长得少而且时间长。...

我们一直做15kb的质粒，但是转化后总是没有目的菌，感觉是转化不成功，以下是我们的转化步骤：1.融解感受态，加入1ul质粒，轻弹后冰浴30min。2.热激42度，90s，再冰浴2min。3.加入900ul无抗性的LB培养基，37度摇床220rpm，1h。4、13000rpm，4度离心5min，去上清700ul，混匀剩余300ul涂板，37度过夜。不知楼主的转化步骤是怎么样的，或者哪些步骤优化了，希望能告知，谢谢！
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12楼2015-02-08 01:33:01
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惰惰228

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hb467116237 at 2013-07-29 19:31:23
谢谢，后来实验做出来了 ，可能片段大小有点大，加上使用了三种抗生素，所以转化效率有点低，菌长得少而且时间长。...

请问，你的菌用了多久长出来的？后面接着做接转了吧，这一步长得慢对后面没啥影响吧？自己也在做，这一步转化长了两三天才出来呢，不知道正常否，想看看你用了多久。谢谢！
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原来你也在这里
13楼2016-08-24 03:49:01
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yz521

新虫 (初入文坛)
你好，我最近也在做ET12567的转化，我的质量粒大概40kb，转了很多次都转不进去。。。请问您最后是怎么转化成功的呢
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14楼2018-04-25 16:31:07
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