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hb467116237

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1153
帖子: 80
在线: 114小时
虫号: 1670017
注册: 2012-03-06
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 转化长不出来菌

微生物的虫虫们看过来，帮我解决下这个问题：我构建的载体大小在16~17kb之间，转ET12567/pUZ8002，重复了好几次都长不出菌来。用的质粒量分别有2、5、10微，是钙转的感受态。不知道什么原因，这步做不出来，实验就没法进行了，捉急啊。

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1楼 2013-07-18 09:41:07

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helongxia

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 1.7小时
虫号: 1322370
注册: 2011-06-13
专业: 咽喉及颈部疾病

引用回帖:

10楼: Originally posted by hb467116237 at 2013-07-29 19:31:23
谢谢，后来实验做出来了，可能片段大小有点大，加上使用了三种抗生素，所以转化效率有点低，菌长得少而且时间长。...

我们一直做15kb的质粒，但是转化后总是没有目的菌，感觉是转化不成功，以下是我们的转化步骤：1.融解感受态，加入1ul质粒，轻弹后冰浴30min。2.热激42度，90s，再冰浴2min。3.加入900ul无抗性的LB培养基，37度摇床220rpm，1h。4、13000rpm，4度离心5min，去上清700ul，混匀剩余300ul涂板，37度过夜。不知楼主的转化步骤是怎么样的，或者哪些步骤优化了，希望能告知，谢谢！