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hb467116237

金虫 (小有名气)

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[求助] 转化长不出来菌

微生物的虫虫们看过来，帮我解决下这个问题：我构建的载体大小在16~17kb之间，转ET12567/pUZ8002，重复了好几次都长不出菌来。用的质粒量分别有2、5、10微，是钙转的感受态。不知道什么原因，这步做不出来，实验就没法进行了，捉急啊。

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1楼 2013-07-18 09:41:07

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hb467116237

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-20 15:47:33
转化平板采用的抗生素浓度比较低（但能够抑制野生型时），会有较高的转化效率，相当于一个诱导表达的过程！其次，不知道你是转到什么菌种，有的菌会自己形成一层膜，感受态细胞很难制作，因而也就很难转进去。还 ...

我是用pOJ446构建的载体，后边要做大片段缺失。感受态细胞是ET12567，以前转pIB139的时候效率很高，同样是使用了三种抗生素，但是不知道这次为什么这么低