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dewdan

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR总是出现好多突变怎么办啊

PCR扩增cDNA连到t载体后测序结果总是有很多突变怎么办啊？？1800bp就有十几个突变，翻译成氨基酸也是有八九个突变，用的是phusion酶啦，郁闷……求各位高手指点
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1楼 2013-06-23 16:32:17
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xwchen24

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 20:00:36
楼主需要优化反应体系,,,根据phusion的说明书来，，或者有可能使SNP,,,
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2楼2013-06-23 17:12:46
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 20:00:44
高保真酶也有一定的错配，要不优化体系要不换换其他更高级的高保真酶！
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自己的路，自己快乐的走
3楼2013-06-23 18:47:43
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 同意 2013-06-24 07:57:18
换高保真酶，反应体系尽量标准，也能提高准确性。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-06-23 19:18:13
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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dewdan: 金币+2, ★有帮助, 只能试试了……谢谢啦 2013-06-24 13:32:14
dewdan: 金币+3, ★有帮助 2013-07-05 10:27:07
提高退火温度，减少非特异扩增，换成高保真酶。
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5楼2013-06-23 20:21:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试试提高退火温度，减少循环数目。
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6楼2013-06-23 23:23:25
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
Phusion 1800bp十几个突变基本不可能的。。

LZ你的测序结果图谱怎么样？用几个引物测得序？  不同克隆突变有一致性么？
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7楼2013-06-24 03:46:57
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