| 查看: 1404 | 回复: 3 | |||
[求助]
双酶切连接转化后貌似出现自连
|
我想克隆一个基因到表达载体PGEX-6P-2，该质粒大小5000，我的目的基因3000左右，连接前酶切产物检测了，大小正确，练接转化后，挑克隆，提取质粒，并单酶切检测大小，竟然是5000左右，感觉像自连，但双酶切应该不会发生自连，我用的两个酶是EcoI 和Not I，PCR扩增也没出来，如果没连上，应该菌不会找。求分析愿意，哪的问题，想了半天找不出来，谢谢！见图；第二个图，第一个带，是质粒双酶切，2为，目的基因双酶切，3转化后，挑克隆，提取质粒单酶切，4是22000的Marker 123.JPG  456.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 酶切、连接和转化
已经有9人回复
- pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。
已经有23人回复
- 连接检测时双酶切总是切不开
已经有9人回复
- 双酶切之后，线状质粒的连接问题
已经有13人回复
- 目的片段和pMD18-T simple vector 的连接
已经有20人回复
- 双酶切后目的条带的疑问？
已经有8人回复
- 双酶切后载体片段变小
已经有8人回复
- 目的片段与载体连接后无法检测出
已经有7人回复
- 连接产物双酶切
已经有11人回复
- 质粒酶切切不动，质粒在宿主中繁衍酶切位点会突变么？
已经有8人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- 双酶切，体系，切不出来
已经有10人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 为什么我做的酶切连接总是不长斑呢？
已经有24人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qfbushizi2008: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-13 13:26:01
myprayer: 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:40:00
感谢参与，应助指数 +1
qfbushizi2008: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-13 13:26:01
myprayer: 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:40:00
| 载体自连说明双酶切载体时酶切不完全，虽然切成线性分子，但是载体双酶切的带和单酶切的带几乎一样大，很难分辨的。你的情况很可能是其中的一个酶切得不好。你做双酶切载体的同时最好分别做两个酶的单酶切对照，酶的用量要根据酶活性和质粒的用量来加。 |
2楼2013-06-13 12:53:18
gzl9901
铁杆木虫 (文坛精英)
very good
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 6279.5
- 红花: 28
- 沙发: 2
- 帖子: 11263
- 在线: 1769.2小时
- 虫号: 1294464
- 注册: 2011-05-13
- 专业: 计算机软件
3楼2013-06-13 13:42:54
4楼2013-06-13 16:08:15
