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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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119904386

铁虫 (小有名气)

[求助] 16s引物扩增大肠杆菌,产物不是1500,而是在700上下各有一条带

用的是这对引物:
16s-F:5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3
16s-R:5-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3

开始是因为拿这对引物扩增芽孢杆菌得不到目的条带,直接做的菌液PCR,未煮沸也没提取DNA。于是就怀疑芽孢菌是不是形成芽孢后95度预变性破坏不了菌体(预变性10min还是不行),无法释放出DNA模板。所以,想拿G-菌(大肠杆菌)做个对照。奇怪的是,大肠杆菌的扩增产物并不是1.5kb,而是在marker 700bp上下各有一条带(也许加起来1.5kb),同时芽孢菌还是没有带

求解
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志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, good! 2013-06-11 12:43:28
预变性时间、退火温度、引物用量是主要影响因素,可从这几方面去做正交试验探索。
菌没有完全裂解,则试沸水浴或延长预变性时间。
引物如果反复冻融的话有可能会裂解断裂。
菌株的遗传性状不稳定,或许在传代的过程中产生了突变;菌株不纯,体系中出现了污染也有可能的。导致模板不纯。
菌株正常,会不会是引物浓度太高,如果引物的浓度很高产生引物二聚体的概率就比较高。
2楼2013-06-10 22:52:43
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我是用341f和907r
3楼2013-06-12 10:33:49
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