24小时热门版块排行榜    

查看: 1302  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

邂逅星期八

金虫 (正式写手)

[求助] 求助:PCR扩增出现问题,求指点

自己设计的引物,在做温度梯度时条带比较亮,但按照这个条件做扩增却扩增不出来(温度、循环都一致),其中一对引物只在用做温度梯度的模板下出条带,换模板就不出(换的模板是一个种群的不同个体的DNA),有哪些可能的原因啊,求高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

青春就要在路上
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

甜甜520smile

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 邂逅星期八 at 2013-06-06 17:27:38
PCR仪是换了,但是温度设置都精确到小数点后了,PCR仪影响很大吗?模板浓度是提高了...需不需要重新做梯度?...

有些PCR仪器不是很稳定,建议你做梯度或者后继试验的时候,尽量将PCR管放在仪器的中间部分,同时仪器的四个角落可以放装满水的PCR管,这样可以使仪器温度相对稳定些。
同时加样的时候,尽量在冰上操作,引物和酶避免反复冻融
4楼2013-06-07 11:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

甜甜520smile

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
邂逅星期八: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢,为我修正实验提供了思路 2013-06-06 17:30:19
是不是你换了PCR仪器?
换换TAq酶?建议用混合的mix
不知道是不是你加样的时候在冰上没有?
还有模板处理的浓度?
2楼2013-06-06 16:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邂逅星期八

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 甜甜520smile at 2013-06-06 16:28:26
是不是你换了PCR仪器?
换换TAq酶?建议用混合的mix
不知道是不是你加样的时候在冰上没有?
还有模板处理的浓度?

PCR仪是换了,但是温度设置都精确到小数点后了,PCR仪影响很大吗?模板浓度是提高了...需不需要重新做梯度?
青春就要在路上
3楼2013-06-06 17:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

realismsy

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 邂逅星期八 at 2013-06-06 17:27:38
PCR仪是换了,但是温度设置都精确到小数点后了,PCR仪影响很大吗?模板浓度是提高了...需不需要重新做梯度?...

PCR仪很看缘分的,如果一开始哪一台好使就盯着一台用
5楼2013-06-09 18:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 301求调剂 +6 yy要上岸呀 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:58 by 星空星月
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 268求调剂 +3 简单点0 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:15 by wangjihu
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +3 小李0854 2026-03-16 3/150 2026-03-17 13:40 by 热情沙漠
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 9/450 2026-03-17 10:29 by xujiaoszu
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见