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邂逅星期八

金虫 (正式写手)

[求助] 求助:PCR扩增出现问题,求指点

自己设计的引物,在做温度梯度时条带比较亮,但按照这个条件做扩增却扩增不出来(温度、循环都一致),其中一对引物只在用做温度梯度的模板下出条带,换模板就不出(换的模板是一个种群的不同个体的DNA),有哪些可能的原因啊,求高人指点
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青春就要在路上
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甜甜520smile

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
邂逅星期八: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢,为我修正实验提供了思路 2013-06-06 17:30:19
是不是你换了PCR仪器?
换换TAq酶?建议用混合的mix
不知道是不是你加样的时候在冰上没有?
还有模板处理的浓度?
2楼2013-06-06 16:28:26
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邂逅星期八

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 甜甜520smile at 2013-06-06 16:28:26
是不是你换了PCR仪器?
换换TAq酶?建议用混合的mix
不知道是不是你加样的时候在冰上没有?
还有模板处理的浓度?

PCR仪是换了,但是温度设置都精确到小数点后了,PCR仪影响很大吗?模板浓度是提高了...需不需要重新做梯度?
青春就要在路上
3楼2013-06-06 17:27:38
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甜甜520smile

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 邂逅星期八 at 2013-06-06 17:27:38
PCR仪是换了,但是温度设置都精确到小数点后了,PCR仪影响很大吗?模板浓度是提高了...需不需要重新做梯度?...

有些PCR仪器不是很稳定,建议你做梯度或者后继试验的时候,尽量将PCR管放在仪器的中间部分,同时仪器的四个角落可以放装满水的PCR管,这样可以使仪器温度相对稳定些。
同时加样的时候,尽量在冰上操作,引物和酶避免反复冻融
4楼2013-06-07 11:20:22
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realismsy

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 邂逅星期八 at 2013-06-06 17:27:38
PCR仪是换了,但是温度设置都精确到小数点后了,PCR仪影响很大吗?模板浓度是提高了...需不需要重新做梯度?...

PCR仪很看缘分的,如果一开始哪一台好使就盯着一台用
5楼2013-06-09 18:33:12
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邂逅星期八

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by realismsy at 2013-06-09 18:33:12
PCR仪很看缘分的,如果一开始哪一台好使就盯着一台用...

近十个人共用一台,我也想以后就用一台
青春就要在路上
6楼2013-06-09 20:01:09
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