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我是战神把地

金虫 (小有名气)

[求助] 载体双酶切后，胶回收的效率极低，胶回收试剂盒正常，双酶切后的电泳图也正常， 已有2人参与

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1楼 2013-05-31 11:50:15
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lf6220

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-31 23:29:02
我也遇到过这种情况，我是多做几个酶切管，切胶后，都放到一个纯化柱内，30-50微升的60度的TE缓冲液分两次加入，这样可以提高双酶切后载体的回收量
不知道能否帮到你
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2楼2013-05-31 13:55:08
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实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:29:09
胶回收试剂盒本身就收不回来太多，你可以试试多切点，我一般切60ul的大体系，切5~10ugDNA，然后载体收回来大概能用三四次吧
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有啥不高兴的事儿，说出来大家乐呵乐呵~
3楼2013-05-31 14:04:59
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-20 20:08:41
胶回收kit回收的片段是有限制的，一般的kit好像是回收大于100bp小于4kb
另外，反应体系加大，载体用量增加，参考kit说明书如何得到更高得率（加热buffer什么的）
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
4楼2013-06-01 14:57:36
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
楼主，你的问题解决了吗，我胶回收浓度只有十几纳克每微升，太低了，我切了200ul的体系才回收这么点
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5楼2013-09-18 08:36:40
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desheng101

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

胶回收量本身就低，建议多切几管，回收挂柱子可重复挂几次，希望对楼主有些帮助
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6楼2013-09-22 10:48:25
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走过三月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

胶回收是效率不高的，酶切的时候用大体系，回收最后一步过柱的时候，把好几管的都过到一个柱子里去吧，洗脱液预热一下效果也会好一些
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7楼2013-09-22 13:43:08
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sunny00博博

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-09-18 08:36:40
楼主，你的问题解决了吗，我胶回收浓度只有十几纳克每微升，太低了，我切了200ul的体系才回收这么点

虫友，你那时的问题怎么解决的？小虫我最近遇到了这一棘手的问题，望指点！不胜感激啊。
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8楼2014-07-18 21:26:13
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sunny00博博 at 2014-07-18 21:26:13
虫友，你那时的问题怎么解决的？小虫我最近遇到了这一棘手的问题，望指点！不胜感激啊。...

载体后来用PCR回收试剂盒回收的，我切下来的片段很小。胶回收浓度本来就很低，一般我都要浓缩的。
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9楼2014-07-19 15:43:53
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sunny00博博

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-07-19 15:43:53
载体后来用PCR回收试剂盒回收的，我切下来的片段很小。胶回收浓度本来就很低，一般我都要浓缩的。...

质粒也可以用PCR回收试剂盒回收吗?你是用什么方法回收的呢?最后使用水溶的吗？我接下来要做转化需要5-10ug的质粒,是不是得回收好多管啊？
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10楼2014-07-20 15:44:37
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