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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切回收
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徐乐XL

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切回收

请教一下各位大神，为什么我分步酶切质粒用试剂盒回收后测其浓度发现特别低，只有约不到8ng/ul，并且260/280比值竟然小于1，请教各位这是为什么？Sample Text
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1楼 2013-05-08 21:33:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
徐乐XL(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-09 08:16:25
质粒的初始用量是多少？回收率应该在50-80%左右。如果你的回收率小于20%的话是有问题的。
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2楼2013-05-09 02:25:27
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lvanmorison

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
徐乐XL(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:46:23
本帖内容被屏蔽
3楼2013-05-09 10:51:18
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徐乐XL

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-09 02:25:27
质粒的初始用量是多少？回收率应该在50-80%左右。如果你的回收率小于20%的话是有问题的。

初始浓度为70ng/ul左右，我比明白的是为什么260/280比值那么小，是因为里面的酶没有去掉吗？
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4楼2013-05-09 19:44:23
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徐乐XL

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvanmorison at 2013-05-09 10:51:18
分布酶切一般是因为最适宜温度，和buffer的问题。
你可以换种方法，比如，第一种没切后，使用醋酸钠以及无水乙醇来沉淀质粒片段，然后重新溶解，再进行第二次酶切，这次回收用凝胶回收试剂盒。因为回收试剂盒回收效 ...

谢谢，学到了新的方法。我想问一下为什么260/280比值那么低呢？是因为有酶回收时没有去掉吗？
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5楼2013-05-09 19:46:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
徐乐XL: 金币+3 2013-05-10 22:29:42
引用回帖:
4楼: Originally posted by 徐乐XL at 2013-05-09 19:44:23
初始浓度为70ng/ul左右，我比明白的是为什么260/280比值那么小，是因为里面的酶没有去掉吗？...

有可能是蛋白杂质的影响，也有可能是因为样品浓度太低，A260/A280测得不准确。
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6楼2013-05-10 01:12:53
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2009107082

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你初始浓度是多少，两次酶切都跑胶然后回收吗，如果这样的话回收率肯定低。如果切下来的是小片段，可以不用凝胶电泳，直接将酶切产物用胶回收试剂盒回收，这样回收率会高点。
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7楼2013-05-10 15:29:47
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