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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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nmhsd

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒电泳为什么会呈月牙形

今天用一个过期的质粒小量提取试剂盒提出的质粒,琼脂糖电泳检测发现,不是传说中的一条带、两条带、或者三条带,而是一个月牙形。求解为什么,是否会影响下游的酶切连接。另外,质粒大量提取一般该如何做,是简单的扩大培养扩大提取反应的试剂量吗?本来是用作酶切的,看来提取的浓度也不是很高。
菌液浓度A600=0.5(pMD19T),1(pET30a)
菌液总量各35ml
各质粒最终溶解于300ul水中
电泳上样量10ul,marker 同样10ul

电泳图



[ Last edited by nmhsd on 2012-7-31 at 17:10 ]
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-01 14:04:47
nmhsd: 金币+3 2012-10-01 00:19:00
质粒提取是很简单成熟的实验,感觉楼主用过期的试剂盒做,做不出结果纠结,不如换试剂盒,估计八成是试剂盒的问题,电泳应该是没问题的,看你的Marker就知道了,所以建议楼主换试剂盒,这是最有效便捷的方式
8楼2012-08-01 11:30:20
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普通回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)

这些我都看过了。依然不能解释。
2楼2012-07-31 17:15:01
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wangmin2010

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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nmhsd: 金币+3 2012-10-01 00:19:15
浓度太低了,估计做酶切回收后,都看不到条带了
多提点菌液,让质粒的条带亮点
自己的人生是要靠自己改变的!
3楼2012-07-31 19:28:19
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
nmhsd: 金币+1 2012-10-01 00:19:32
看不到你的图,月牙形是否楼主跑胶电压太大造成的?
4楼2012-07-31 22:34:11
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:04:26
nmhsd: 金币+2 2012-10-01 00:19:51
可能你的试剂盒有问题吧,怎么有大量的RNA呢?而且质粒的回收率太低了,电泳基本看不到条带。电泳出现月牙形状是有可能的,因为每次电泳的因素不一样,下次电泳时就好了,注意更换缓冲液。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
相信自己,一定能成功!
5楼2012-07-31 23:13:42
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个质粒试剂盒太次了吧?还是操作问题?第一,提取量不高,第二,纯度不高,会影响后续酶切实验。
6楼2012-08-01 10:48:04
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chongju135

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:04:35
nmhsd: 金币+1 2012-10-01 00:20:21
第一有RNA干扰,而且RNA浓度很高,建议先去除RNA后在跑样看看
第二如果去除RNA后还是呈月牙状,可能你的DNA含量也比较高,建议稀释。
7楼2012-08-01 11:14:55
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nmhsd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by chongju135 at 2012-08-01 11:14:55
第一有RNA干扰,而且RNA浓度很高,建议先去除RNA后在跑样看看
第二如果去除RNA后还是呈月牙状,可能你的DNA含量也比较高,建议稀释。

RNA干扰不会影响下游实验室,随他去了。为什么说DNA含量较高呢?条带很浅啊,我担心的是浓度了,酶切回收不好做。
9楼2012-08-01 14:06:41
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nmhsd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-01 11:30:20
质粒提取是很简单成熟的实验,感觉楼主用过期的试剂盒做,做不出结果纠结,不如换试剂盒,估计八成是试剂盒的问题,电泳应该是没问题的,看你的Marker就知道了,所以建议楼主换试剂盒,这是最有效便捷的方式

请问你们一般用什么够公司的质粒提取,感觉如何?
10楼2012-08-01 14:07:32
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