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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒电泳为什么会呈月牙形
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nmhsd

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒电泳为什么会呈月牙形

今天用一个过期的质粒小量提取试剂盒提出的质粒，琼脂糖电泳检测发现，不是传说中的一条带、两条带、或者三条带，而是一个月牙形。求解为什么，是否会影响下游的酶切连接。另外，质粒大量提取一般该如何做，是简单的扩大培养扩大提取反应的试剂量吗？本来是用作酶切的，看来提取的浓度也不是很高。
菌液浓度A600=0.5（pMD19T），1（pET30a）
菌液总量各35ml
各质粒最终溶解于300ul水中
电泳上样量10ul，marker 同样10ul

电泳图



[ Last edited by nmhsd on 2012-7-31 at 17:10 ]
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1楼 2012-07-31 17:08:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-01 14:04:47
nmhsd: 金币+3 2012-10-01 00:19:00
质粒提取是很简单成熟的实验，感觉楼主用过期的试剂盒做，做不出结果纠结，不如换试剂盒，估计八成是试剂盒的问题，电泳应该是没问题的，看你的Marker就知道了，所以建议楼主换试剂盒，这是最有效便捷的方式
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8楼2012-08-01 11:30:20
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普通回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
这些我都看过了。依然不能解释。
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2楼2012-07-31 17:15:01
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wangmin2010

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nmhsd: 金币+3 2012-10-01 00:19:15
浓度太低了，估计做酶切回收后，都看不到条带了
多提点菌液，让质粒的条带亮点
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自己的人生是要靠自己改变的！
3楼2012-07-31 19:28:19
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
nmhsd: 金币+1 2012-10-01 00:19:32
看不到你的图，月牙形是否楼主跑胶电压太大造成的？
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4楼2012-07-31 22:34:11
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:04:26
nmhsd: 金币+2 2012-10-01 00:19:51
可能你的试剂盒有问题吧，怎么有大量的RNA呢？而且质粒的回收率太低了，电泳基本看不到条带。电泳出现月牙形状是有可能的，因为每次电泳的因素不一样，下次电泳时就好了，注意更换缓冲液。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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相信自己，一定能成功！
5楼2012-07-31 23:13:42
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个质粒试剂盒太次了吧？还是操作问题？第一，提取量不高，第二，纯度不高，会影响后续酶切实验。
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6楼2012-08-01 10:48:04
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chongju135

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:04:35
nmhsd: 金币+1 2012-10-01 00:20:21
第一有RNA干扰，而且RNA浓度很高，建议先去除RNA后在跑样看看
第二如果去除RNA后还是呈月牙状，可能你的DNA含量也比较高，建议稀释。
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7楼2012-08-01 11:14:55
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nmhsd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by chongju135 at 2012-08-01 11:14:55
第一有RNA干扰，而且RNA浓度很高，建议先去除RNA后在跑样看看
第二如果去除RNA后还是呈月牙状，可能你的DNA含量也比较高，建议稀释。

RNA干扰不会影响下游实验室，随他去了。为什么说DNA含量较高呢？条带很浅啊，我担心的是浓度了，酶切回收不好做。
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9楼2012-08-01 14:06:41
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nmhsd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-01 11:30:20
质粒提取是很简单成熟的实验，感觉楼主用过期的试剂盒做，做不出结果纠结，不如换试剂盒，估计八成是试剂盒的问题，电泳应该是没问题的，看你的Marker就知道了，所以建议楼主换试剂盒，这是最有效便捷的方式

请问你们一般用什么够公司的质粒提取，感觉如何？
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10楼2012-08-01 14:07:32
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