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nmhsd

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒电泳为什么会呈月牙形

今天用一个过期的质粒小量提取试剂盒提出的质粒,琼脂糖电泳检测发现,不是传说中的一条带、两条带、或者三条带,而是一个月牙形。求解为什么,是否会影响下游的酶切连接。另外,质粒大量提取一般该如何做,是简单的扩大培养扩大提取反应的试剂量吗?本来是用作酶切的,看来提取的浓度也不是很高。
菌液浓度A600=0.5(pMD19T),1(pET30a)
菌液总量各35ml
各质粒最终溶解于300ul水中
电泳上样量10ul,marker 同样10ul

电泳图



[ Last edited by nmhsd on 2012-7-31 at 17:10 ]
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-01 14:04:47
nmhsd: 金币+3 2012-10-01 00:19:00
质粒提取是很简单成熟的实验,感觉楼主用过期的试剂盒做,做不出结果纠结,不如换试剂盒,估计八成是试剂盒的问题,电泳应该是没问题的,看你的Marker就知道了,所以建议楼主换试剂盒,这是最有效便捷的方式
8楼2012-08-01 11:30:20
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nmhsd

木虫 (正式写手)

这些我都看过了。依然不能解释。
2楼2012-07-31 17:15:01
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wangmin2010

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
nmhsd: 金币+3 2012-10-01 00:19:15
浓度太低了,估计做酶切回收后,都看不到条带了
多提点菌液,让质粒的条带亮点
自己的人生是要靠自己改变的!
3楼2012-07-31 19:28:19
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
nmhsd: 金币+1 2012-10-01 00:19:32
看不到你的图,月牙形是否楼主跑胶电压太大造成的?
4楼2012-07-31 22:34:11
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