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nmhsd

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒电泳为什么会呈月牙形

今天用一个过期的质粒小量提取试剂盒提出的质粒,琼脂糖电泳检测发现,不是传说中的一条带、两条带、或者三条带,而是一个月牙形。求解为什么,是否会影响下游的酶切连接。另外,质粒大量提取一般该如何做,是简单的扩大培养扩大提取反应的试剂量吗?本来是用作酶切的,看来提取的浓度也不是很高。
菌液浓度A600=0.5(pMD19T),1(pET30a)
菌液总量各35ml
各质粒最终溶解于300ul水中
电泳上样量10ul,marker 同样10ul

电泳图



[ Last edited by nmhsd on 2012-7-31 at 17:10 ]
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nmhsd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by chongju135 at 2012-08-01 11:14:55
第一有RNA干扰,而且RNA浓度很高,建议先去除RNA后在跑样看看
第二如果去除RNA后还是呈月牙状,可能你的DNA含量也比较高,建议稀释。

RNA干扰不会影响下游实验室,随他去了。为什么说DNA含量较高呢?条带很浅啊,我担心的是浓度了,酶切回收不好做。
9楼2012-08-01 14:06:41
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查看全部 16 个回答

nmhsd

木虫 (正式写手)

这些我都看过了。依然不能解释。
2楼2012-07-31 17:15:01
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wangmin2010

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
nmhsd: 金币+3 2012-10-01 00:19:15
浓度太低了,估计做酶切回收后,都看不到条带了
多提点菌液,让质粒的条带亮点
自己的人生是要靠自己改变的!
3楼2012-07-31 19:28:19
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
nmhsd: 金币+1 2012-10-01 00:19:32
看不到你的图,月牙形是否楼主跑胶电压太大造成的?
4楼2012-07-31 22:34:11
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