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银虫 (小有名气)

[求助] 求助PCR扩增

新手入门,扩增CO1通用引物(LCO1940/LCO2198)未扩增出来,查到文献(见附件)上关于该物种有专门的引物。合成后,按文献提供的程序进行扩增,出现非特异条带。引物情况如下:
Gene      Primer         Sequence                                                                     Direction
COI        F1.2           5'-CNACNAAYCAYAARRAYMTYGG-3'                              Forward
              F2.1           5'-GCHCAYCAYATRTTYACHGTWGGW-3'                       Forward
              manco1F    5'-TACWCGAGCWTATTTTACAGGAGC-3'                       Forward   
              R2              5'-WCCWACDGTRAAYATRTGRTGDGC-3'                      Reverse
              CALVIN       5'-GGRAARAAWGTTAARTTWACTCC-3'                          Reverse
              PAT            5'-TCCAATGCACTAATCTGCCATATTA-3'                         Reverse
排列组合成9对引物进行扩增,结果见附图。目标片段大小应该为1420bp.求各位大侠指点迷津。小女子依靠这货本科毕业!大谢!


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