| 查看: 1830 | 回复: 7 | ||
chenxiang29银虫 (正式写手)
|
[求助]
pET-22b构建好了质粒，表达不出来？
|
构建好了之后IPTG诱导不成功，翻开以前跑的电泳图，感觉构建好的重组质粒大小理论上是6000bp左右，当然是超螺旋，但是电泳却是3000bp多，附图1（M,重组质粒1,2，pET-22b）,不知道各位虫友出现过这种问题么，酶切后是在5000以上，附图2(只看line3 为双酶切，line 5为 pet22b双酶切)  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有96人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- 重组质粒提出来看不到，PC显示目的条带已插入，求助
已经有6人回复
- 蛋白表达不出来是怎么回事？
已经有12人回复
- 转化后提不出质粒
已经有11人回复
- 质粒酶切切不动，质粒在宿主中繁衍酶切位点会突变么？
已经有8人回复
- 相同质粒，不同的单克隆有的不能表达？
已经有4人回复
- 真核表达质粒构建
已经有4人回复
- 目的蛋白序列连接pet15b测序结果正确为何不表达
已经有7人回复
- 关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题
已经有14人回复
- 菌株构建成功后，再复苏保存的菌种，提不出质粒，怎么办？
已经有9人回复
- 提不出质粒，不知道出了什么问题，求助……
已经有17人回复
- 求助：用pXMJ19构建的重组质粒在谷氨酸棒杆菌不表达，应该如何解决？
已经有6人回复
- 有人提取过PET-28a的质粒吗？
已经有18人回复
- 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于PEt-28a质粒载体表达蛋白质的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于质粒构建与表达的问题
已经有14人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-04-30 11:46:40
chenxiang29
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 302.1
- 散金: 70
- 红花: 2
- 帖子: 576
- 在线: 215.7小时
- 虫号: 1252309
- 注册: 2011-04-01
- 性别: GG
- 专业: 临床微生物学检验
3楼2013-04-30 12:40:38
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2013-05-01 03:00:05
stevenshi021
新虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 545.3
- 红花: 5
- 帖子: 276
- 在线: 35.1小时
- 虫号: 2272292
- 注册: 2013-02-03
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1<br>chenxiang29: 金币+5, <font color=red>★★★</font>很有帮助 <font color="gray">2013-05-01 11:11:23</font>
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-05-01 12:06:34
感谢参与，应助指数 +1<br>chenxiang29: 金币+5, <font color=red>★★★</font>很有帮助 <font color="gray">2013-05-01 11:11:23</font>
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-05-01 12:06:34
|
蛋白表达不成功有很多原因,在排除基因序列问题之外一般有以下原因: 1 目的基因来源,特别对来在于真核生物的蛋白,在原核生物中表达一般需要看看稀有密码子之类的东西,如果存在大量连续的稀有密码子,则一般表达不成功 2 你所谓的表达不成功是看的总蛋白还是纯化蛋白,需要对表达细胞的总蛋白,可溶蛋白和不溶蛋白最好跑胶时候有非诱导的样品进行对照 3 最后就是宿主细胞了,有时候不同的宿主细胞也会影响蛋白表达,常用的有BL21, Rosseta, gammi,什么之类的DE3菌 蛋白表达问题很多的，如果可以做个WB确定一下，是蛋白不能表达还是表达量低。 希望对你有用！ |
5楼2013-05-01 10:31:56
chenxiang29
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 302.1
- 散金: 70
- 红花: 2
- 帖子: 576
- 在线: 215.7小时
- 虫号: 1252309
- 注册: 2011-04-01
- 性别: GG
- 专业: 临床微生物学检验
6楼2013-05-01 10:40:57
stevenshi021
新虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 545.3
- 红花: 5
- 帖子: 276
- 在线: 35.1小时
- 虫号: 2272292
- 注册: 2013-02-03
- 专业: 生物化学
7楼2013-05-01 10:55:34
青菜小虫
银虫 (著名写手)
风居住的街道
- MolEPI: 5
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1666.5
- 散金: 1249
- 红花: 29
- 帖子: 1111
- 在线: 352.2小时
- 虫号: 1332002
- 注册: 2011-06-27
- 性别: MM
- 专业: 病毒学
8楼2013-05-30 21:17:48
