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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒提出来看不到，PC显示目的条带已插入，求助
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匿名

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1楼 2013-01-22 17:41:16
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smzhou791208

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:00:47
你是指在大肠杆菌中还是脓杆菌中,大肠杆菌中一般质粒提取都能看到条带的,脓杆菌中提取的得率要低得多,但跑电泳还是能看到条带的(当然很浅了),你可以把几毫升的菌液离心后合并到一起来抽提试试看!
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2楼2013-01-22 18:08:40
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cxl_yll

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不太了解你的载体 是穿梭质粒么 如果是 可以提取质粒 看不到也没关系 然后转化大肠杆菌 扩繁后 再次提取
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3楼2013-01-22 19:38:39
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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198903133397: 金币+2, ★有帮助 2013-01-26 15:47:09
你提质粒后直接上3ul电泳，看不到条带，就扩大你的初始细菌量，减少质粒回收是的elusion buffer 的体积
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4楼2013-01-22 22:14:04
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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198903133397: 金币+3, ★有帮助 2013-01-26 15:46:28
你的质粒在大肠杆菌中的拷贝数太低，想办法提高质粒在大肠杆菌的拷贝数，可尝试在培养基中加入氯霉素
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5楼2013-01-22 22:19:31
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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198903133397: 金币+3, ★有帮助 2013-01-26 15:46:52
我建议你别用菌落PCR，把菌养起来再做PCR，因为菌落上可能残存你转化时加的质粒，所以能扩增出质粒上的目的条带。如果养起来再做PCR还是阳性结果，在考虑质粒拷贝数问题，那可能就要换骨架了。
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6楼2013-01-24 12:22:38
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
扩大初始细菌量看看，应该可以。
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蓝精灵
7楼2013-01-24 12:52:16
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