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chenxiang29

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[求助] pET-22b构建好了质粒，表达不出来？

构建好了之后IPTG诱导不成功，翻开以前跑的电泳图，感觉构建好的重组质粒大小理论上是6000bp左右，当然是超螺旋，但是电泳却是3000bp多，附图1（M,重组质粒1,2，pET-22b）,不知道各位虫友出现过这种问题么，酶切后是在5000以上，附图2(只看line3 为双酶切，line 5为 pet22b双酶切)

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1楼 2013-04-29 21:58:45

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chenxiang29

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引用回帖:

5楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-01 10:31:56
蛋白表达不成功有很多原因,在排除基因序列问题之外一般有以下原因:
1 目的基因来源,特别对来在于真核生物的蛋白,在原核生物中表达一般需要看看稀有密码子之类的东西,如果存在大量连续的稀有密码子,则一般表达不成功 ...

我确实表达的是真核生物蛋白，但是500bp的基因大概只有5个稀有密码子，且不连续，您说这有必要试试rosseta吗