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chenxiang29银虫 (正式写手)
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pET-22b构建好了质粒，表达不出来？
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构建好了之后IPTG诱导不成功，翻开以前跑的电泳图，感觉构建好的重组质粒大小理论上是6000bp左右，当然是超螺旋，但是电泳却是3000bp多，附图1（M,重组质粒1,2，pET-22b）,不知道各位虫友出现过这种问题么，酶切后是在5000以上，附图2(只看line3 为双酶切，line 5为 pet22b双酶切)  |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1<br>chenxiang29: 金币+5, <font color=red>★★★</font>很有帮助 <font color="gray">2013-05-01 11:11:23</font>
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-05-01 12:06:34
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蛋白表达不成功有很多原因,在排除基因序列问题之外一般有以下原因: 1 目的基因来源,特别对来在于真核生物的蛋白,在原核生物中表达一般需要看看稀有密码子之类的东西,如果存在大量连续的稀有密码子,则一般表达不成功 2 你所谓的表达不成功是看的总蛋白还是纯化蛋白,需要对表达细胞的总蛋白,可溶蛋白和不溶蛋白最好跑胶时候有非诱导的样品进行对照 3 最后就是宿主细胞了,有时候不同的宿主细胞也会影响蛋白表达,常用的有BL21, Rosseta, gammi,什么之类的DE3菌 蛋白表达问题很多的，如果可以做个WB确定一下，是蛋白不能表达还是表达量低。 希望对你有用！ |
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