24小时热门版块排行榜    

查看: 2175  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] pET-22b构建好了质粒,表达不出来?

构建好了之后IPTG诱导不成功,翻开以前跑的电泳图,感觉构建好的重组质粒大小理论上是6000bp左右,当然是超螺旋,但是电泳却是3000bp多,附图1(M,重组质粒1,2,pET-22b),不知道各位虫友出现过这种问题么,酶切后是在5000以上,附图2(只看line3 为双酶切,line 5为 pet22b双酶切)

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

smile to the world
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

楼主有此质粒的质粒图谱吗?给我发一个好吗
生命即这般无尽变数,辗转来去皆苛求不得
8楼2013-05-30 21:17:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenxiang29(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-30 14:04:02
构建的质粒是否测序?
一般盒子提的质粒绝大部分是超螺旋构象,看质粒大小需要做单酶切成线状才能与marker比。
2楼2013-04-30 11:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenxiang29

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-30 11:46:40
构建的质粒是否测序?
一般盒子提的质粒绝大部分是超螺旋构象,看质粒大小需要做单酶切成线状才能与marker比。

已经测序正确,就是怕质粒其他的位置少了一段什么的。图2是双酶切,是在5000以上,与空质粒双酶切一致
smile to the world
3楼2013-04-30 12:40:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenxiang29 at 2013-04-30 12:40:38
已经测序正确,就是怕质粒其他的位置少了一段什么的。图2是双酶切,是在5000以上,与空质粒双酶切一致...

如果怀疑载体本身有问题,实验室其他人是否也用这个载体,他们做的蛋白是否诱导表达成功了?当然,你也可以根据质粒序列和图谱设计引物,对载体的重要部分测序。
4楼2013-05-01 03:00:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见