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chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] pET-22b构建好了质粒，表达不出来？

构建好了之后IPTG诱导不成功，翻开以前跑的电泳图，感觉构建好的重组质粒大小理论上是6000bp左右，当然是超螺旋，但是电泳却是3000bp多，附图1（M,重组质粒1,2，pET-22b）,不知道各位虫友出现过这种问题么，酶切后是在5000以上，附图2(只看line3 为双酶切，line 5为 pet22b双酶切)
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smile to the world
1楼 2013-04-29 21:58:45
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

楼主有此质粒的质粒图谱吗？给我发一个好吗
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
8楼2013-05-30 21:17:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chenxiang29(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-30 14:04:02
构建的质粒是否测序？
一般盒子提的质粒绝大部分是超螺旋构象，看质粒大小需要做单酶切成线状才能与marker比。
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2楼2013-04-30 11:46:40
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chenxiang29

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-30 11:46:40
构建的质粒是否测序？
一般盒子提的质粒绝大部分是超螺旋构象，看质粒大小需要做单酶切成线状才能与marker比。

已经测序正确，就是怕质粒其他的位置少了一段什么的。图2是双酶切，是在5000以上，与空质粒双酶切一致
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smile to the world
3楼2013-04-30 12:40:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenxiang29 at 2013-04-30 12:40:38
已经测序正确，就是怕质粒其他的位置少了一段什么的。图2是双酶切，是在5000以上，与空质粒双酶切一致...

如果怀疑载体本身有问题，实验室其他人是否也用这个载体，他们做的蛋白是否诱导表达成功了？当然，你也可以根据质粒序列和图谱设计引物，对载体的重要部分测序。
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4楼2013-05-01 03:00:05
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