应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-22b构建好了质粒，表达不出来？
51/1返回列表
查看: 2302  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] pET-22b构建好了质粒，表达不出来？

构建好了之后IPTG诱导不成功，翻开以前跑的电泳图，感觉构建好的重组质粒大小理论上是6000bp左右，当然是超螺旋，但是电泳却是3000bp多，附图1（M,重组质粒1,2，pET-22b）,不知道各位虫友出现过这种问题么，酶切后是在5000以上，附图2(只看line3 为双酶切，line 5为 pet22b双酶切)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
smile to the world
1楼 2013-04-29 21:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-01 12:06:45
这么小的基因应该还好！你试试换换细胞吧！有时候会有用的！我如果遇到这样的情况我就是讲这个目的基因重新克隆到一个新的backbon。有时候说不好，就是载体原件在出现问题！
祝你好运！
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-05-01 10:55:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chenxiang29(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-30 14:04:02
构建的质粒是否测序？
一般盒子提的质粒绝大部分是超螺旋构象，看质粒大小需要做单酶切成线状才能与marker比。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-30 11:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenxiang29

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-30 11:46:40
构建的质粒是否测序？
一般盒子提的质粒绝大部分是超螺旋构象，看质粒大小需要做单酶切成线状才能与marker比。

已经测序正确，就是怕质粒其他的位置少了一段什么的。图2是双酶切，是在5000以上，与空质粒双酶切一致
赞一下 回复此楼
smile to the world
3楼2013-04-30 12:40:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenxiang29 at 2013-04-30 12:40:38
已经测序正确，就是怕质粒其他的位置少了一段什么的。图2是双酶切，是在5000以上，与空质粒双酶切一致...

如果怀疑载体本身有问题，实验室其他人是否也用这个载体，他们做的蛋白是否诱导表达成功了？当然，你也可以根据质粒序列和图谱设计引物，对载体的重要部分测序。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-01 03:00:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-09 10:23 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 06:39 by l48hFd8Nwae2
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 11/550 2026-11-09 00:26 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭