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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何解释这个PCR结果？
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朝着江河走

金虫 (小有名气)

[交流] 如何解释这个PCR结果？ 已有17人参与

连续两次了，PCR结果都是这样，DNA提取没问题。不知道是什么原因，与引物有关吗？

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生命在于运动
1楼 2013-04-27 09:40:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-01 18:54:34
要找出具体原因，我建议先从引物入手。我个人经验，引物是绝对关键的问题，拿到引物之后，先找到合适的退火温度，再进行实验。一般是先做个梯度PCR，找到合适的退火温度；再寻找合适的循环数等问题，，，，，，
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11楼2013-04-28 10:49:52
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kkzzll0624

铁杆木虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-01 18:54:48
基因组Dna跑个胶，引物核实一下，用实验室比较成熟的反应试剂，反应体系做一次，退火温度用软件预测一下，实际实验时退火温度再稍微低点。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好学习，天天向上！
12楼2013-04-28 11:03:31
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fancyxie

新虫 (正式写手)
★
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做个梯度PCR先检验一下引物再说
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飞翔靠翅膀更靠梦想！
22楼2013-05-01 10:42:03
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rongduoyan

铜虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-01 18:56:05
gyesang: 回帖置顶 2013-05-01 18:56:07
查找原因关键是多做对照，楼主可以用别人做出来的引物，最好是内参基因按照别人做出来的条件用自己提的DNA做模版，先P一个看，如果有说明不是你DNA提取的问题，是引物的问题，如果没有，可能要考虑你模版以及PCR体系的问题，如果是所有的东西用的别人的，只有模版是自己的，那很好确认是模版的问题还是PCR的问题了，楼主多做对照吧！
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23楼2013-05-01 12:45:11
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普通回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+1, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-27 13:49:36
什么样本？基因组DNA还是cDNA？ 做温度梯度了没？
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2楼2013-04-27 09:51:39
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朝着江河走

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sl35537417 at 2013-04-27 09:51:39
什么样本？基因组DNA还是cDNA？ 做温度梯度了没？

基因组DNA，没做过温度梯度，怎么做啊？谢谢
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生命在于运动
3楼2013-04-27 10:15:24
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sl35537417

木虫 (正式写手)
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什么物种的基因组？真核的原核的？找个能做温度梯度的PCR仪  退火温度按照不同温度进行PCR
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4楼2013-04-27 10:34:08
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朝着江河走

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sl35537417 at 2013-04-27 10:34:08
什么物种的基因组？真核的原核的？找个能做温度梯度的PCR仪  退火温度按照不同温度进行PCR

放线菌，没做过温度PCR，一般的PCR仪可以做吗？
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生命在于运动
5楼2013-04-27 10:58:46
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sl35537417

木虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by 朝着江河走 at 2013-04-27 10:58:46
放线菌，没做过温度PCR，一般的PCR仪可以做吗？...

不确定   如果在45-65 之间的退火温度都P不出来的话 就换引物啊
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6楼2013-04-27 11:31:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 15:09:27
模板定浓度了吗？用同样的模板是否可以P出其他基因？LZ连引物二聚体也没有，怀疑PCR体系是否正确。此外，目的片段应该多大，PCR程序没有问题吗？这些都没问题后，优化引物的退火温度。
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7楼2013-04-27 14:47:58
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jw1985629

新虫 (初入文坛)
★
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程序问题，引物问题。你排除下吧
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i still have so much to do
8楼2013-04-27 21:01:03
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raftsman

铜虫 (正式写手)
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模板是什么
盐粒子浓度会不会太高
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9楼2013-04-28 00:04:11
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 朝着江河走 at 2013-04-27 10:58:46
放线菌，没做过温度PCR，一般的PCR仪可以做吗？...

过程pcr仪一般都能做梯度PCR实验。
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10楼2013-04-28 10:47:51
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