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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何解释这个PCR结果？
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xjtu0025

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提高退火温度，2到4度。。。出不来就再提高。。你肯定有模板，但是特异性太多了。模板不好p东西都没有的。。
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21楼2013-05-01 09:38:40
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fancyxie

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做个梯度PCR先检验一下引物再说
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飞翔靠翅膀更靠梦想！
22楼2013-05-01 10:42:03
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rongduoyan

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-01 18:56:05
gyesang: 回帖置顶 2013-05-01 18:56:07
查找原因关键是多做对照，楼主可以用别人做出来的引物，最好是内参基因按照别人做出来的条件用自己提的DNA做模版，先P一个看，如果有说明不是你DNA提取的问题，是引物的问题，如果没有，可能要考虑你模版以及PCR体系的问题，如果是所有的东西用的别人的，只有模版是自己的，那很好确认是模版的问题还是PCR的问题了，楼主多做对照吧！
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23楼2013-05-01 12:45:11
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sd3824289

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-01 18:56:17
一般情况下，PCR仪上都可以设置温度梯度，用梯度做一次看看。如果有的话还好，要是没有的话建议换引物！
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
24楼2013-05-01 15:15:51
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朝着江河走

金虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by sd3824289 at 2013-05-01 15:15:51
一般情况下，PCR仪上都可以设置温度梯度，用梯度做一次看看。如果有的话还好，要是没有的话建议换引物！

做过了，没结果，估计引物有问题
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生命在于运动
25楼2013-05-02 10:13:15
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朝着江河走

金虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-01 08:23:03
有没有弥散条带啊，如果有弥散条带，和帖子上一样，说明Taq酶，以及扩展体系都还work。如果没有弥散，我建议你再做PCR时，加一个内参（管家基因的引物，一般肯定能出的），如果内参再不出来，那只能是模板有问题了 ...

连弥散条带都没有
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生命在于运动
26楼2013-05-02 10:15:25
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by 朝着江河走 at 2013-05-02 10:15:25
连弥散条带都没有...

赶紧的，使用内参，把内参扩增出来再说。没有好的过程，说啥都白费。
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27楼2013-05-02 10:35:41
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哆啦B梦1024

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用touch down 试试
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28楼2013-05-02 10:40:30
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这是出现涂抹带
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
其对策有：1.减少酶量，或调换另一来源的酶。2.减少dNTP的浓度。3.适当降低Mg2+浓 度。5.增加模板量，减少循环次数。
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29楼2013-07-07 10:47:13
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hyc_charles

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做一下touch down，从65℃每个循环降低0.7℃，10个循环，在56摄氏度做20个循环，看看结果如何
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不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
30楼2013-07-15 20:53:14
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