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xjtu0025

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提高退火温度,2到4度。。。出不来就再提高。。你肯定有模板,但是特异性太多了。模板不好p东西都没有的。。
21楼2013-05-01 09:38:40
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fancyxie

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做个梯度PCR先检验一下引物再说
飞翔靠翅膀更靠梦想!
22楼2013-05-01 10:42:03
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rongduoyan

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-05-01 18:56:05
gyesang: 回帖置顶 2013-05-01 18:56:07
查找原因关键是多做对照,楼主可以用别人做出来的引物,最好是内参基因按照别人做出来的条件用自己提的DNA做模版,先P一个看,如果有说明不是你DNA提取的问题,是引物的问题,如果没有,可能要考虑你模版以及PCR体系的问题,如果是所有的东西用的别人的,只有模版是自己的,那很好确认是模版的问题还是PCR的问题了,楼主多做对照吧!
23楼2013-05-01 12:45:11
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sd3824289

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-05-01 18:56:17
一般情况下,PCR仪上都可以设置温度梯度,用梯度做一次看看。如果有的话还好,要是没有的话建议换引物!
坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
24楼2013-05-01 15:15:51
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朝着江河走

金虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by sd3824289 at 2013-05-01 15:15:51
一般情况下,PCR仪上都可以设置温度梯度,用梯度做一次看看。如果有的话还好,要是没有的话建议换引物!

做过了,没结果,估计引物有问题
生命在于运动
25楼2013-05-02 10:13:15
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朝着江河走

金虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-01 08:23:03
有没有弥散条带啊,如果有弥散条带,和帖子上一样,说明Taq酶,以及扩展体系都还work。如果没有弥散,我建议你再做PCR时,加一个内参(管家基因的引物,一般肯定能出的),如果内参再不出来,那只能是模板有问题了 ...

连弥散条带都没有
生命在于运动
26楼2013-05-02 10:15:25
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by 朝着江河走 at 2013-05-02 10:15:25
连弥散条带都没有...

赶紧的,使用内参,把内参扩增出来再说。没有好的过程,说啥都白费。
27楼2013-05-02 10:35:41
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哆啦B梦1024

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用touch down 试试
28楼2013-05-02 10:40:30
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这是出现涂抹带
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。
其对策有:1.减少酶量,或调换另一来源的酶。2.减少dNTP的浓度。3.适当降低Mg2+浓 度。5.增加模板量,减少循环次数。
29楼2013-07-07 10:47:13
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hyc_charles

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你做一下touch down,从65℃每个循环降低0.7℃,10个循环,在56摄氏度做20个循环,看看结果如何
不但要做一个优秀的人,更要做一个无可取代的人…
30楼2013-07-15 20:53:14
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