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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何解释这个PCR结果？
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-01 18:54:34
要找出具体原因，我建议先从引物入手。我个人经验，引物是绝对关键的问题，拿到引物之后，先找到合适的退火温度，再进行实验。一般是先做个梯度PCR，找到合适的退火温度；再寻找合适的循环数等问题，，，，，，
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11楼2013-04-28 10:49:52
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kkzzll0624

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-01 18:54:48
基因组Dna跑个胶，引物核实一下，用实验室比较成熟的反应试剂，反应体系做一次，退火温度用软件预测一下，实际实验时退火温度再稍微低点。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好学习，天天向上！
12楼2013-04-28 11:03:31
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zuoyue911

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
13楼2013-04-28 11:55:56
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nufxmc

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般的PCR仪都能做，只是操作难易程度有差别
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14楼2013-04-28 16:08:48
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cao126

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-01 18:55:18
DNA就没有跑出来，应该PCR扩增问题，可能tap失活，看看能不能增加tap酶的量 或者换一种。
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15楼2013-04-28 16:26:31
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朝着江河走

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-04-28 10:49:52
要找出具体原因，我建议先从引物入手。我个人经验，引物是绝对关键的问题，拿到引物之后，先找到合适的退火温度，再进行实验。一般是先做个梯度PCR，找到合适的退火温度；再寻找合适的循环数等问题，，，，，，

前天刚做了梯度PCR，电泳什么都没有
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生命在于运动
16楼2013-04-29 10:48:06
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朝着江河走

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sl35537417 at 2013-04-27 09:51:39
什么样本？基因组DNA还是cDNA？ 做温度梯度了没？

前天刚做了梯度PCR，电泳什么都没有，估计引物有问题
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生命在于运动
17楼2013-04-29 10:53:14
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朝着江河走

金虫 (小有名气)
谢谢大家了，前天做了梯度PCR，还是不行，得换引物了，好郁闷
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生命在于运动
18楼2013-04-29 10:56:05
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liangq465

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-01 18:55:31
你应该把引物长度 PCR片段长度以及PCR的反应体系和PCR条件说出来的
当然模板你已经说了
这样大家才能综合分析的
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自信人生二百年，会当水击三千里。
19楼2013-04-29 11:07:54
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-01 18:55:48
引用回帖:
16楼: Originally posted by 朝着江河走 at 2013-04-29 10:48:06
前天刚做了梯度PCR，电泳什么都没有...

有没有弥散条带啊，如果有弥散条带，和帖子上一样，说明Taq酶，以及扩展体系都还work。如果没有弥散，我建议你再做PCR时，加一个内参（管家基因的引物，一般肯定能出的），如果内参再不出来，那只能是模板有问题了。还有，内参出来而样品没有出来，那就是引物不好，条件不合适。现在在网上可以收索到GAPDH和action（beta-action）的引物，那些都是可以用的。
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20楼2013-05-01 08:23:03
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