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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母转化验证
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] 酵母转化验证 已有1人参与

大家好，最近有个事情很郁闷。把质粒转到酵母后，做质粒PCR，居然有好多条带。而在转酵母之前就只有单一条带啊，不知道为什么，到底哪里出了问题？
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1楼 2013-04-26 22:17:29
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
木有人回答么。。。
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2楼2013-05-03 16:43:10
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意孤城_

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你说的转到酵母之后的质粒PCR是指提取酵母质粒之后为模版PCR吗？还是怎样
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3楼2013-05-03 23:07:16
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-03 23:07:16
你说的转到酵母之后的质粒PCR是指提取酵母质粒之后为模版PCR吗？还是怎样

就是提取酵母质粒之后为模版做PCR
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4楼2013-05-04 21:59:15
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意孤城_

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-06 02:22:01
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4楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-05-04 21:59:15
就是提取酵母质粒之后为模版做PCR...

可能是纯度不高，建议吧提取的酵母质粒转化到细菌中提质粒在做PCR看看。如果你是单转一个载体到酵母里面出现这种情况有点费解，如果是2个或者更多就很容易理解了。
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5楼2013-05-05 11:28:35
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-05 11:28:35
可能是纯度不高，建议吧提取的酵母质粒转化到细菌中提质粒在做PCR看看。如果你是单转一个载体到酵母里面出现这种情况有点费解，如果是2个或者更多就很容易理解了。...

转过一次，但是没长出来。不知道是不是质粒浓度太低了。从酵母里面提取的质粒跑电泳能有条带么？
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6楼2013-05-05 23:23:20
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意孤城_

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-05-05 23:23:20
转过一次，但是没长出来。不知道是不是质粒浓度太低了。从酵母里面提取的质粒跑电泳能有条带么？...

基本上看不到，我提酵母质粒浓度基本上维持在10ng/ul（3ML菌提完后30ul水溶），如果跑胶很难看到的（我没跑过，用机子测得），转化加5ul（要复苏）能长很多。如果你提酵母质粒没问题的话，估计就是杂菌污染或者是提的就不是质粒
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7楼2013-05-06 11:23:28
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-06 11:23:28
基本上看不到，我提酵母质粒浓度基本上维持在10ng/ul（3ML菌提完后30ul水溶），如果跑胶很难看到的（我没跑过，用机子测得），转化加5ul（要复苏）能长很多。如果你提酵母质粒没问题的话，估计就是杂菌污染或者是提 ...

额？好吧。。。。在提吧
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8楼2013-05-06 15:19:44
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