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loop00木虫 (小有名气)
阿凡达
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[求助]
GST 和 His Tag的选择
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需要制备多抗，因此表达重组蛋白并纯化，用于免疫兔子， 对多抗特异性要求高，要求重组蛋白是越纯越好 GST标签纯化效果好，想用 听说GST优缺点，请大家一一列举 谢谢 |
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loop00
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【答案】应助回帖
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总体来说His tag比较好。 GST比his的specificity高,但是缺点是本身有较强的antigenecity,而且如果蛋白不溶,很难(但不是不能)用变性的方法纯化.当然如果楼主用包涵体immunize兔子,那就无所谓了,可是这样的话,也就无所谓纯化不纯化了. HIS如果做的好,也很纯.一般来说为了防止各种潜在的失败,可以全都用变性的方法纯化蛋白,因为这样基本可保证HIS tag露在外面,既可以和ni beads结合,而同时纯度又高,再者透析之后也不影响immunization。 |
2楼2013-04-24 10:00:37
loop00
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3楼2013-04-24 10:49:54
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