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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

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[求助] GST 和 His Tag的选择

需要制备多抗，因此表达重组蛋白并纯化，用于免疫兔子，
对多抗特异性要求高，要求重组蛋白是越纯越好
GST标签纯化效果好，想用
听说GST优缺点，请大家一一列举
谢谢

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坚强面对生活

1楼 2013-04-24 07:43:11

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loop00

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhaolf at 2013-04-24 10:00:37
总体来说His tag比较好。
GST比his的specificity高,但是缺点是本身有较强的antigenecity,而且如果蛋白不溶,很难(但不是不能)用变性的方法纯化.当然如果楼主用包涵体immunize兔子,那就无所谓了,可是这样的话,也就无 ...

谢谢回复啊，我做过组氨酸纯化，但是GST没做过的，GST纯化的时候不能加尿素吗？

如果设计引物的时候加入蛋白酶切位点，纯化之后用蛋白酶把GST切掉再免疫行不行呢