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loop00木虫 (小有名气)
阿凡达
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[求助]
GST 和 His Tag的选择
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需要制备多抗，因此表达重组蛋白并纯化，用于免疫兔子， 对多抗特异性要求高，要求重组蛋白是越纯越好 GST标签纯化效果好，想用 听说GST优缺点，请大家一一列举 谢谢 |
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【答案】应助回帖
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loop00: 金币+2 2013-04-25 09:12:28
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loop00: 金币+2 2013-04-25 09:12:28
| GST标签作为纯化是在his之前的，GST本身比较大，对蛋白表达可能有积极或消极的影响，标签和蛋白之间加酶切位点是一贯的做法，以备是否要除去标签。GST纯化你要加尿素是不是因为你做的包涵体，尿素对蛋白本身其实是有影响的，这就牵扯到蛋白复性的问题，还涉及标签活性。所以现在许多蛋白用his做标签，一个是本身就小，特异性也好，如果怕傍柱不牢，可以加6his或者更多，关键是包涵体蛋白纯化用his标签就没有尿素影响标签的问题了。 |
5楼2013-04-24 15:13:55
zhaolf
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【答案】应助回帖
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总体来说His tag比较好。 GST比his的specificity高,但是缺点是本身有较强的antigenecity,而且如果蛋白不溶,很难(但不是不能)用变性的方法纯化.当然如果楼主用包涵体immunize兔子,那就无所谓了,可是这样的话,也就无所谓纯化不纯化了. HIS如果做的好,也很纯.一般来说为了防止各种潜在的失败,可以全都用变性的方法纯化蛋白,因为这样基本可保证HIS tag露在外面,既可以和ni beads结合,而同时纯度又高,再者透析之后也不影响immunization。 |
2楼2013-04-24 10:00:37
loop00
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3楼2013-04-24 10:49:54
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