| 查看: 2218 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
loop00木虫 (小有名气)
阿凡达
|
[求助]
GST 和 His Tag的选择
|
||
|
需要制备多抗，因此表达重组蛋白并纯化，用于免疫兔子， 对多抗特异性要求高，要求重组蛋白是越纯越好 GST标签纯化效果好，想用 听说GST优缺点，请大家一一列举 谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到我的蛋白上去？
已经有13人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 蛋白纯化标签有哪些?
已经有6人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- 怎样在表达载体质粒接上His tag标签
已经有8人回复
- 关于his-tag蛋白的分离和纯化 微生物产生！文献多多益善
已经有10人回复
- 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
已经有10人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- NI-NTA HIs Bind Resin 怎样填充HIS-tag柱子
已经有7人回复
- 想给自己的蛋白加个HIS标签？方法。。。。
已经有8人回复
- 使用NOVAGEN的His-tag蛋白纯化柱出现的问题
已经有3人回复
- 渗透冲击法 裂解诱导后的E.coli BL21(DE3)，提纯HIS-tag蛋白，求指导
已经有12人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 蛋白表达纠结啊
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教各位大侠已知一蛋白质的全长cDNA,如何纯化该蛋白质？
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】凝血酶切割GST-tag 求助！
已经有13人回复
chlorella409
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-25 06:43:38
loop00: 金币+2 2013-04-25 09:12:28
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-25 06:43:38
loop00: 金币+2 2013-04-25 09:12:28
| GST标签作为纯化是在his之前的，GST本身比较大，对蛋白表达可能有积极或消极的影响，标签和蛋白之间加酶切位点是一贯的做法，以备是否要除去标签。GST纯化你要加尿素是不是因为你做的包涵体，尿素对蛋白本身其实是有影响的，这就牵扯到蛋白复性的问题，还涉及标签活性。所以现在许多蛋白用his做标签，一个是本身就小，特异性也好，如果怕傍柱不牢，可以加6his或者更多，关键是包涵体蛋白纯化用his标签就没有尿素影响标签的问题了。 |
5楼2013-04-24 15:13:55
zhaolf
木虫 (著名写手)
胖虎爱唱歌
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 3356.7
- 红花: 10
- 帖子: 1689
- 在线: 478.3小时
- 虫号: 1872406
- 注册: 2012-06-29
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析，以后常来 2013-04-25 06:44:16
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析，以后常来 2013-04-25 06:44:16
|
总体来说His tag比较好。 GST比his的specificity高,但是缺点是本身有较强的antigenecity,而且如果蛋白不溶,很难(但不是不能)用变性的方法纯化.当然如果楼主用包涵体immunize兔子,那就无所谓了,可是这样的话,也就无所谓纯化不纯化了. HIS如果做的好,也很纯.一般来说为了防止各种潜在的失败,可以全都用变性的方法纯化蛋白,因为这样基本可保证HIS tag露在外面,既可以和ni beads结合,而同时纯度又高,再者透析之后也不影响immunization。 |
2楼2013-04-24 10:00:37
loop00
木虫 (小有名气)
阿凡达
- BioEPI: 1
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1553.3
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 299
- 在线: 109.9小时
- 虫号: 466614
- 注册: 2007-11-24
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
3楼2013-04-24 10:49:54
zhaolf
木虫 (著名写手)
胖虎爱唱歌
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 3356.7
- 红花: 10
- 帖子: 1689
- 在线: 478.3小时
- 虫号: 1872406
- 注册: 2012-06-29
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
4楼2013-04-24 11:04:09
