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1楼2013-04-10 08:55:34

lidonghong

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恩照此看来是没有连接成功，你转了空载没有？

生物化学与分子生物学

2楼2013-04-10 08:58:39

guaiyaya

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你确定每一步都做到位了没有？

3楼2013-04-10 09:36:25

德国工兵铲

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yoyo单眼皮(gyesang代发): 金币+2, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-28 17:30:37

遇到这种事情总是怀疑试剂与操作，其实最基本的是先确认平板没有问题吧？
之前遇到一位，做了很多平板，然后就是不长东西，LB培养基很好做，很多人都不在意，不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。

4楼2013-04-10 10:20:25

yoyo单眼皮

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-10 10:20:25
遇到这种事情总是怀疑试剂与操作，其实最基本的是先确认平板没有问题吧？
之前遇到一位，做了很多平板，然后就是不长东西，LB培养基很好做，很多人都不在意，不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。

那配制LB培养基要注意什么呢？你的意思是~

5楼2013-04-10 10:41:45

德国工兵铲

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引用回帖:

5楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2013-04-10 10:41:45
那配制LB培养基要注意什么呢？你的意思是~...

你可以先检测一下平板有没有问题，如果有还没有加抗性的固体，你溶解之后直接倒一个平板，再倒一个有抗性的，然后涂你们实验室保存的已经确定转化成功菌液。看看能不能长。

6楼2013-04-10 10:48:02

collinbush

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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-11 17:18:55

可能原因有:
酶切问题，由于未长菌落，载体未切开的可能性较小，但片段可能没切开，或其中一个切开了，另一个未切开，建议pcr产物直接联PMD18T载体测序，再从T载体上酶切回收目的片段，另通过T载体测序分析，还可以看一下引物是否正常，我们就遇到过引物出问题的情况。
连接问题，鉴于片段较大，调整载体与片段比例，重新连接，当然必须保证连接酶首先没问题。
转化问题：感受态转化效率如何，建议验证一下，建议作空载体转化对照。

永不言弃

7楼2013-04-11 14:23:21