应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接转化不长菌是怎么回事？？？
161/2返回列表12下一页
查看: 4387  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不长菌是怎么回事？？？

连接1.5KB的片段 转化后涂平板不长菌 是怎么回事？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-10 08:55:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
恩 照此看来是没有连接成功，你转了空载没有？
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
2楼2013-04-10 08:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定每一步都做到位了没有？
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-10 09:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yoyo单眼皮(gyesang代发): 金币+2, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-28 17:30:37
遇到这种事情总是怀疑试剂与操作，其实最基本的是先确认平板没有问题吧？
之前遇到一位，做了很多平板，然后就是不长东西，LB培养基很好做，很多人都不在意，不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-10 10:20:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-10 10:20:25
遇到这种事情总是怀疑试剂与操作，其实最基本的是先确认平板没有问题吧？
之前遇到一位，做了很多平板，然后就是不长东西，LB培养基很好做，很多人都不在意，不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。

那配制LB培养基要注意什么呢？你的意思是~
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-10 10:41:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2013-04-10 10:41:45
那配制LB培养基要注意什么呢？你的意思是~...

你可以先检测一下平板有没有问题，如果有还没有加抗性的固体，你溶解之后直接倒一个平板，再倒一个有抗性的，然后涂你们实验室保存的已经确定转化成功菌液。看看能不能长。
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-10 10:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

collinbush

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-11 17:18:55
可能原因有:
酶切问题，由于未长菌落，载体未切开的可能性较小，但片段可能没切开，或其中一个切开了，另一个未切开，建议pcr产物直接联PMD18T载体测序，再从T载体上酶切回收目的片段，另通过T载体测序分析，还可以看一下引物是否正常，我们就遇到过引物出问题的情况。
连接问题，鉴于片段较大，调整载体与片段比例，重新连接，当然必须保证连接酶首先没问题。
转化问题：感受态转化效率如何，建议验证一下，建议作空载体转化对照。
赞一下 回复此楼
永不言弃
7楼2013-04-11 14:23:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是链接时间太短了啊
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-11 15:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
的一步一步的查：带外源基因与不带，酶切，跑电泳。板子是否合适，比如抗生素。再转。
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-11 16:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有很多原因 连接中的各个细节都要注意 LB的配置 AMP的用量
赞一下 回复此楼
人物
10楼2013-04-11 16:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yoyo单眼皮 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 4/200 2026-11-07 10:03 by byEJ59EAM6hR
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭