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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接转化不长菌是怎么回事？？？
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不长菌是怎么回事？？？

连接1.5KB的片段 转化后涂平板不长菌 是怎么回事？？？
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1楼 2013-04-10 08:55:34
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
恩 照此看来是没有连接成功，你转了空载没有？
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生物化学与分子生物学
2楼2013-04-10 08:58:39
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定每一步都做到位了没有？
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3楼2013-04-10 09:36:25
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yoyo单眼皮(gyesang代发): 金币+2, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-28 17:30:37
遇到这种事情总是怀疑试剂与操作，其实最基本的是先确认平板没有问题吧？
之前遇到一位，做了很多平板，然后就是不长东西，LB培养基很好做，很多人都不在意，不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。
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4楼2013-04-10 10:20:25
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-10 10:20:25
遇到这种事情总是怀疑试剂与操作，其实最基本的是先确认平板没有问题吧？
之前遇到一位，做了很多平板，然后就是不长东西，LB培养基很好做，很多人都不在意，不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。

那配制LB培养基要注意什么呢？你的意思是~
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5楼2013-04-10 10:41:45
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2013-04-10 10:41:45
那配制LB培养基要注意什么呢？你的意思是~...

你可以先检测一下平板有没有问题，如果有还没有加抗性的固体，你溶解之后直接倒一个平板，再倒一个有抗性的，然后涂你们实验室保存的已经确定转化成功菌液。看看能不能长。
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6楼2013-04-10 10:48:02
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collinbush

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-11 17:18:55
可能原因有:
酶切问题，由于未长菌落，载体未切开的可能性较小，但片段可能没切开，或其中一个切开了，另一个未切开，建议pcr产物直接联PMD18T载体测序，再从T载体上酶切回收目的片段，另通过T载体测序分析，还可以看一下引物是否正常，我们就遇到过引物出问题的情况。
连接问题，鉴于片段较大，调整载体与片段比例，重新连接，当然必须保证连接酶首先没问题。
转化问题：感受态转化效率如何，建议验证一下，建议作空载体转化对照。
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永不言弃
7楼2013-04-11 14:23:21
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是链接时间太短了啊
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8楼2013-04-11 15:43:26
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
的一步一步的查：带外源基因与不带，酶切，跑电泳。板子是否合适，比如抗生素。再转。
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9楼2013-04-11 16:14:38
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zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有很多原因 连接中的各个细节都要注意 LB的配置 AMP的用量
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人物
10楼2013-04-11 16:18:17
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