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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不长菌是怎么回事？？？

连接1.5KB的片段 转化后涂平板不长菌 是怎么回事？？？
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1楼 2013-04-10 08:55:34
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collinbush

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-11 17:18:55
可能原因有:
酶切问题，由于未长菌落，载体未切开的可能性较小，但片段可能没切开，或其中一个切开了，另一个未切开，建议pcr产物直接联PMD18T载体测序，再从T载体上酶切回收目的片段，另通过T载体测序分析，还可以看一下引物是否正常，我们就遇到过引物出问题的情况。
连接问题，鉴于片段较大，调整载体与片段比例，重新连接，当然必须保证连接酶首先没问题。
转化问题：感受态转化效率如何，建议验证一下，建议作空载体转化对照。
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永不言弃
7楼2013-04-11 14:23:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
恩 照此看来是没有连接成功，你转了空载没有？
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生物化学与分子生物学
2楼2013-04-10 08:58:39
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定每一步都做到位了没有？
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3楼2013-04-10 09:36:25
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yoyo单眼皮(gyesang代发): 金币+2, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-28 17:30:37
遇到这种事情总是怀疑试剂与操作，其实最基本的是先确认平板没有问题吧？
之前遇到一位，做了很多平板，然后就是不长东西，LB培养基很好做，很多人都不在意，不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。
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4楼2013-04-10 10:20:25
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