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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 连接转化不长菌是怎么回事???

连接1.5KB的片段 转化后涂平板不长菌 是怎么回事???
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collinbush

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-11 17:18:55
可能原因有:
酶切问题,由于未长菌落,载体未切开的可能性较小,但片段可能没切开,或其中一个切开了,另一个未切开,建议pcr产物直接联PMD18T载体测序,再从T载体上酶切回收目的片段,另通过T载体测序分析,还可以看一下引物是否正常,我们就遇到过引物出问题的情况。
连接问题,鉴于片段较大,调整载体与片段比例,重新连接,当然必须保证连接酶首先没问题。
转化问题:感受态转化效率如何,建议验证一下,建议作空载体转化对照。
永不言弃
7楼2013-04-11 14:23:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
恩 照此看来是没有连接成功,你转了空载没有?
生物化学与分子生物学
2楼2013-04-10 08:58:39
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你确定每一步都做到位了没有?
3楼2013-04-10 09:36:25
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yoyo单眼皮(gyesang代发): 金币+2, 鼓励发贴交流,为楼主问题解决提供可能的线索! 2013-04-28 17:30:37
遇到这种事情总是怀疑试剂与操作,其实最基本的是先确认平板没有问题吧?
之前遇到一位,做了很多平板,然后就是不长东西,LB培养基很好做,很多人都不在意,不过我觉得先要确定平板与摇菌所用的液体培养基。
4楼2013-04-10 10:20:25
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