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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

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[求助] 连接转化不长菌是怎么回事？？？

连接1.5KB的片段转化后涂平板不长菌是怎么回事？？？

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1楼2013-04-10 08:55:34

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collinbush

金虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-11 17:18:55

可能原因有:
酶切问题，由于未长菌落，载体未切开的可能性较小，但片段可能没切开，或其中一个切开了，另一个未切开，建议pcr产物直接联PMD18T载体测序，再从T载体上酶切回收目的片段，另通过T载体测序分析，还可以看一下引物是否正常，我们就遇到过引物出问题的情况。
连接问题，鉴于片段较大，调整载体与片段比例，重新连接，当然必须保证连接酶首先没问题。
转化问题：感受态转化效率如何，建议验证一下，建议作空载体转化对照。