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ckk1987

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1楼 2013-04-09 18:33:34

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

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ckk1987(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-10 08:46:56
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ckk1987: 金币+1 2013-04-10 12:22:06

你后面的PCR体系是25μl, 10×buffer怎么是5ul?
有没有做证对照（P内参基因）？此外，反转录时候的RNA需要定量，因为反应中RNA太多或者太少都会影响逆转录的效果。你说的估算，是在逆转录的时候加了大致多少μg的RNA呢？

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2楼2013-04-10 02:26:57

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ckk1987

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3楼2013-04-10 08:44:20

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4楼2013-04-10 08:49:51

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guaiyaya

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【答案】应助回帖

★
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ckk1987: 金币+1 2013-04-10 12:21:55

合成CDNA没必要加这么多RNA，4微升差不多就够了，反应体系不是20吗，怎么又加DD水到25微升了呢？
建议用TBE跑胶，时间大约15到20分钟
还有，我之前也是出现这种情况，RNA提的不错就是转不出来，最后才发现原来转录的时候没有用无RNA酶的枪头盒离心管，总之，会有好多想不到的原因，建议楼主再重新理一下步骤。。。祝实验顺利

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5楼2013-04-10 10:55:01

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