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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ckk1987

实习版主

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ckk1987

主管区长

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3楼2013-04-10 08:44:20
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cicelyzh

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

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感谢参与,应助指数 +1
ckk1987(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-10 08:46:56
ckk1987: 金币+1 2013-04-10 08:55:41
ckk1987: 金币+1 2013-04-10 12:22:06
你后面的PCR体系是25μl, 10×buffer怎么是5ul?
有没有做证对照(P内参基因)?此外,反转录时候的RNA需要定量,因为反应中RNA太多或者太少都会影响逆转录的效果。你说的估算,是在逆转录的时候加了大致多少μg的RNA呢?
2楼2013-04-10 02:26:57
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ckk1987

管理员

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4楼2013-04-10 08:49:51
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guaiyaya

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

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感谢参与,应助指数 +1
ckk1987: 金币+1 2013-04-10 12:21:55
合成CDNA没必要加这么多RNA,4微升差不多就够了,反应体系不是20吗,怎么又加DD水到25微升了呢?
建议用TBE跑胶,时间大约15到20分钟
还有,我之前也是出现这种情况,RNA提的不错就是转不出来,最后才发现原来转录的时候没有用无RNA酶的枪头盒离心管,总之,会有好多想不到的原因,建议楼主再重新理一下步骤。。。祝实验顺利
5楼2013-04-10 10:55:01
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