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ckk1987

禁虫 (正式写手)
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1楼 2013-04-09 18:33:34
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)
个人认为你的反转录加的RNA过多，我们提组织的RNA一般是大米粒大小的组织，加40ul的水来溶，浓度都能有微克，反转录有时候都加不到1ul，总量都是使用1ug，如果你没有办法定量的话可以试着跑琼脂糖电泳粗略定量。加不同体积的RNA来跑电泳，然后跟Mark的亮度来比较。
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9楼2013-04-10 16:21:15
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by ckk1987 at 2013-04-10 20:02:01
我想问你一下，怎么跟Mark比对，电泳图上一共是有三个条带的，是看最亮的那个条带吗？...

看三个条带加起来的浓度，Marker的条带都是有说明的，你看自己哪个浓度最亮的那个条带跟Marker最亮的那条接近，就用那个浓度来估算原始RNA的浓度。祝实验顺利。
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15楼2013-04-10 21:29:06
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by ckk1987 at 2013-04-11 11:04:37
我每天做PCR都会重新做逆转录的！因为cDNA在-20度条件下有不能保存很久！...

cDNA在-20可以保存很久。
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21楼2013-04-11 13:10:36
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by ckk1987 at 2013-04-11 11:04:37
我每天做PCR都会重新做逆转录的！因为cDNA在-20度条件下有不能保存很久！...

cDNA可以保存很久的在-20，主要是你的体系可以优化一下，条件也可以优化一下，内参P出来不是说明反转录就完全没问题，因为内参的条件很宽泛，另外给个建议你的体系可以小一点，20就足够了
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22楼2013-04-11 13:15:26
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)
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24楼: Originally posted by ckk1987 at 2013-04-11 14:49:04
很久是多久？...

几个月是没有问题的，我们的cDNA 都是-20冻存，保存三五个月是常事。尽量不要反复冻融就好了
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25楼2013-04-12 15:04:30
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