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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 逆转录和PCR
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ckk1987

禁虫 (正式写手)
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11楼2013-04-10 19:45:15
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ckk1987

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12楼2013-04-10 19:50:00
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ckk1987

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13楼2013-04-10 19:53:04
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ckk1987

禁虫 (正式写手)
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14楼2013-04-10 20:02:01
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shuanyu0202

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by ckk1987 at 2013-04-10 20:02:01
我想问你一下，怎么跟Mark比对，电泳图上一共是有三个条带的，是看最亮的那个条带吗？...

看三个条带加起来的浓度，Marker的条带都是有说明的，你看自己哪个浓度最亮的那个条带跟Marker最亮的那条接近，就用那个浓度来估算原始RNA的浓度。祝实验顺利。
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15楼2013-04-10 21:29:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
11楼: Originally posted by ckk1987 at 2013-04-10 19:45:15
dNTP是2.5mM的，至于引物我已经做了两种浓度，一个是稀释10倍，一个稀释了50倍，效果都不怎么样？还有一个问题，PCR试剂盒上的反应总体系是50ul，如果我要降低到25ul，那对应每一个的添加量能纯粹的减半吗？...

dNTP的终浓度是200μM，你加的量是50μl体系。引物终浓度做一般是0.1-0.5μM。如果用25μl体系，各种成分的终浓度需要一样，也就是相对于50μl体系都减半。
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16楼2013-04-11 02:05:35
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shui_hanliu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by ckk1987 at 2013-04-10 19:50:00
做了内参，我的内参是beta-actin!但也没有出来······...

那就可能是你的cDNA没做好，你要重新逆转录一下
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17楼2013-04-11 09:35:53
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ckk1987

禁虫 (正式写手)
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18楼2013-04-11 11:03:39
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ckk1987

禁虫 (正式写手)
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19楼2013-04-11 11:04:37
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ckk1987

禁虫 (正式写手)
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20楼2013-04-11 11:05:53
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