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weizhi111至尊木虫 (正式写手)
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HIS标签的蛋白不挂柱，求助
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我表达的蛋白纯化时蛋白出现在穿透液里，还比较浓，附件中的胶图从左向右第6个泳道是穿透液，第7，8，9是洗脱下来的蛋白，最后一个泳道是洗脱完后柱子上残余的（我可能没有洗脱完全）。穿透液中损失掉的占了大部分， 是因为蛋白挂柱不好吗？有什么方法改进一下吗？说明：我的蛋白是在包涵体中的，我用了8M尿素水溶液过夜溶解，第二天抽滤才上样的。banding buffer中含有10mM咪唑，洗脱液含有500mM咪唑，这两种buffer中都加了8M尿素，pH=8.0。总共7ml 样品用了2ml填料。我后来把穿透液重新又用bangding buffe混合，分成了3个柱子（重新加了填料）又过了一遍（摇床上混了好几个小时），洗脱下来的还是很少。求各位有经验的大侠指教！ chunhua brm-3-29.jpg |
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 蛋白表达纯化与检测 |
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weizhi111
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