| 查看: 4471 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
weizhi111至尊木虫 (正式写手)
|
[求助]
HIS标签的蛋白不挂柱，求助
|
||
我表达的蛋白纯化时蛋白出现在穿透液里，还比较浓，附件中的胶图从左向右第6个泳道是穿透液，第7，8，9是洗脱下来的蛋白，最后一个泳道是洗脱完后柱子上残余的（我可能没有洗脱完全）。穿透液中损失掉的占了大部分， 是因为蛋白挂柱不好吗？有什么方法改进一下吗？说明：我的蛋白是在包涵体中的，我用了8M尿素水溶液过夜溶解，第二天抽滤才上样的。banding buffer中含有10mM咪唑，洗脱液含有500mM咪唑，这两种buffer中都加了8M尿素，pH=8.0。总共7ml 样品用了2ml填料。我后来把穿透液重新又用bangding buffe混合，分成了3个柱子（重新加了填料）又过了一遍（摇床上混了好几个小时），洗脱下来的还是很少。求各位有经验的大侠指教！ chunhua brm-3-29.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化与检测 |
» 猜你喜欢
调剂求收留
已经有7人回复
-
317求调剂
已经有6人回复
-
336材料求调剂
已经有9人回复
-
341求调剂
已经有7人回复
-
286求调剂
已经有5人回复
-
化学308分求调剂
已经有5人回复
-
0703化学338求调剂！
已经有6人回复
-
求调剂推荐 材料 304
已经有3人回复
-
材料学硕333求调剂
已经有6人回复
-
一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到我的蛋白上去？
已经有13人回复
- 蛋白质的Ni柱纯化问题
已经有23人回复
- 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
已经有8人回复
- His标签的蛋白纯化柱子
已经有10人回复
- 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题
已经有20人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 过带his标签的蛋白时镍柱上样后颜色变棕色是怎么回事
已经有17人回复
- 蛋白纯化问题
已经有13人回复
- 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）
已经有8人回复
- 融合蛋白不挂柱，急！
已经有7人回复
- TEV酶的纯化出问题了，求解？？、
已经有9人回复
- 目的蛋白加myc或his标签？
已经有10人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
已经有9人回复
- 【求助/交流】重组蛋白融合标签的选择
已经有6人回复
- 【求助/交流】His标签
已经有7人回复
- 【求助/交流】蛋白不挂柱怎么办
已经有11人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
weizhi111
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 11477.9
- 散金: 158
- 红花: 1
- 帖子: 722
- 在线: 123小时
- 虫号: 2144809
- 注册: 2012-11-24
- 专业: 昆虫学
3楼2013-03-31 09:09:26
2楼2013-03-31 00:40:54
joan198108
铁杆木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 107 (高中生)
- 金币: 6525.2
- 散金: 12
- 红花: 3
- 帖子: 842
- 在线: 413.5小时
- 虫号: 859607
- 注册: 2009-09-29
- 性别: GG
- 专业: 生物技术药物
4楼2013-03-31 09:38:18
weizhi111
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 11477.9
- 散金: 158
- 红花: 1
- 帖子: 722
- 在线: 123小时
- 虫号: 2144809
- 注册: 2012-11-24
- 专业: 昆虫学
5楼2013-03-31 19:11:25
