24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1542  |  回复: 4

lulushuo

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR后,质粒模板消失了,到底是什么原因啊?有没有遇到同样问题的同学啊??

经过PCR循环后,线性质粒模板消失了,琼脂糖电泳跑不出来条带,是什么原因呢?所有试剂都是新的,枪头都是灭过菌的,为什么质粒就没了呢?并且做了对照,体系中只加线性质粒模板和buffer、ddH2O,PCR循环后也是没有了,难道是线性质粒不稳定,高温降解?有没有同学遇到过同样问题啊?求助求助啊!!补充一句,线性质粒模板是通过设计引物然后PCR、切胶回收获得的,浓度在100ng/ul左右,进行琼脂糖电泳验证,条带正常。希望PCR经验丰富的同学帮忙分析一下啊!感激不尽!
从左到右上样顺序:
Maker,PCR体系1,PCR体系2,只加质粒进行PCR循环-对照,回收完质粒直接上样

胶图.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lulushuo(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-04-27 14:50:01
用线性质粒做PCR的模板一般只加几pg,10ng一下的DNA很难从胶上看到,看不到PCR模板才是正常的体系吧。如果模板加太多可能影响PCR效果,甚至什么也P不出来。
2楼2013-03-26 12:25:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lying09

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-04-27 14:50:09
模板加的量本身在体系中的量就很少,不然LZ可以直接将加入到体系中的模板量跑电泳看是否同样没有条带。看图上,第二条那个是引物自聚吧,可以检查下引物,改变下退火温度之类的。祝好运。
3楼2013-03-26 15:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lulushuo

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-26 12:25:15
用线性质粒做PCR的模板一般只加几pg,10ng一下的DNA很难从胶上看到,看不到PCR模板才是正常的体系吧。如果模板加太多可能影响PCR效果,甚至什么也P不出来。

谢谢回复~~我做的是插入片段和载体互为模板,载体有上百ng呢,应该是能看到的;就说第4孔吧,和第5孔只差没经历PCR程序,为啥就没了呢,可是等量上样啊。。。不解啊!
4楼2013-03-26 16:30:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lulushuo

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lying09 at 2013-03-26 15:00:23
模板加的量本身在体系中的量就很少,不然LZ可以直接将加入到体系中的模板量跑电泳看是否同样没有条带。看图上,第二条那个是引物自聚吧,可以检查下引物,改变下退火温度之类的。祝好运。

谢谢回复~~我做的是插入片段和载体互为模板,载体有上百ng呢,应该是能看到的,2道和3道的可见条带是不同的插入片段;就说第4孔吧,和第5孔只差没经历PCR程序,为啥就没了呢,可是等量上样啊。。。求解啊!
5楼2013-03-26 16:34:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lulushuo 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 archer.. 2026-04-09 6/300 2026-04-09 20:49 by archer..
[考研] 296求调剂 +11 汪!?! 2026-04-08 11/550 2026-04-09 19:30 by 小小树2024
[考研] 332,085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 286求调剂 +5 草木不言 2026-04-04 5/250 2026-04-09 16:01 by 探123
[考研] 化学调剂求助 +14 LULONG1 2026-04-03 19/950 2026-04-09 10:43 by chenxi233
[考研] 一志愿211,0703化学305分求调剂 +20 严西西戏 2026-04-06 26/1300 2026-04-08 22:12 by 凯凯要变帅
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +13 努力奋斗112 2026-04-08 13/650 2026-04-08 21:17 by 学员tURuqU
[考研] 求调剂,现在还能填的 +3 上岸小莹加油 2026-04-08 3/150 2026-04-08 14:30 by zhq0425
[考研] 334分机械专硕求调剂 +3 蛋花紫菜汤 2026-04-03 3/150 2026-04-07 14:49 by 逍遥cocoa
[考研] 求调剂 +4 电气小神童 2026-04-04 6/300 2026-04-07 00:14 by guanxin1001
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9,326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 一志愿武汉理工大学080200机械工程308分,求调剂 +4 终不似从前 2026-04-05 4/200 2026-04-06 11:46 by 考研学校招点人
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
信息提示
请填处理意见