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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酶蛋白自沉淀问题
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chaoen

木虫 (正式写手)

[求助] 酶蛋白自沉淀问题

由于实验室传统，所有Histag纯化的酶都是迅速冷冻后，在-80条件保存，一般都没有问题，酶当中有250 mM imidazole还有50mM左右磷酸盐和氯化钠。但今天准备测定几个酶的酶活，发现其中一个酶在化冻后，大概几个小时后，开始出现大量沉淀。在常温和冰上化冻都出现相同现象。刚化冻后的酶液检测是有活力的。
请教一下是否有朋友遇到类似问题，是不是因为imidazole的原因使酶变性了？或者还有可能是其他情况？多谢！
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1楼 2013-03-22 10:07:40
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wd_bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chaoen: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-03-22 11:08:33
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2013-03-22 14:32:34
新纯化的蛋白，暂时不急冻，看看是不是也会过几小时沉淀，假如是，那可能是蛋白聚合沉淀。可以在纯化中加少量温和变性剂试试。
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2楼2013-03-22 10:48:09
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chaoen

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wd_bio at 2013-03-22 03:48:09
新纯化的蛋白，暂时不急冻，看看是不是也会过几小时沉淀，假如是，那可能是蛋白聚合沉淀。可以在纯化中加少量温和变性剂试试。

多谢回复。那你是不是觉得imidazole导致沉淀的可能性不大？另外，请问哪些温和变性剂可以用来防止蛋白聚合沉淀呢？
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3楼2013-03-22 11:07:29
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wd_bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

温和的变性剂例如SDS，低浓度的尿素，或者低浓度Triton-X100都可以，但是判断哪个有效可能就要作预实验分析了。
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4楼2013-03-22 11:55:29
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该不是咪唑的原因。估计是酶本身不稳定（如其保持结构需要特殊金属离子）
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5楼2013-03-22 11:58:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得SDS挺悬乎，得看酶，我的酶遇到5mM的SDS就不行了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2013-03-23 00:00:02
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