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zhjzhou

木虫 (著名写手)

[求助] 有关蛋白诱导的问题

各位大侠,有做原核表达,诱导蛋白的吗?我用的载体是PET28a,把自己的目的基因克隆到载体中,测序都正确的,然后做诱导,0.1mM的IPTG诱导28度12h,前面是mark,后面第1通道是对照,没有诱导的,后面依次是2:诱导后;3-5:纯化时,接到的蛋白;6-7:纯化后的蛋白;8:透析后的蛋白;9:flow through。
纯化后的蛋白不是我的目的蛋白啊,我的目的蛋白只有40KD左右,现在这个要100多KD啊,不知道怎么回事?有没有知道的啊?帮忙看看,谢谢!

1.jpg[ Last edited by zhjzhou on 2013-3-21 at 14:17 ]
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yinxiang_1

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhjzhou: 金币+3, 有帮助, 好的,谢谢!用纯化的蛋白做WB验证,可以试试,多谢! 2013-03-23 11:14:33
做一个WB验证一下吧
8楼2013-03-23 09:20:23
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无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhjzhou: 金币+2, 有帮助, 是啊,纯化的这个不是我的目的蛋白啊,我的目的蛋白没有那么大,不知道这条是什么 2013-03-21 19:17:47
貌似你的目的蛋白就没有表达,纯化的不是目的蛋白!
2楼2013-03-21 16:26:01
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qianjinyu

铜虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhjzhou: 金币+3, 有帮助, 上样缓冲液里有巯基乙醇的,那最粗的诱导表达的不是我的目的蛋白啊,比我的目的蛋白大很多,我的目的蛋白只有40多,这个要100多呢,是不是形成的二聚体啊? 2013-03-21 19:19:38
对一下读码框,看一下东西有没有弄错!如果都没错的话,检查一下上样液里面有没有巯基乙醇,最粗的那个应该是诱导表达条带
3楼2013-03-21 19:14:02
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zhjzhou

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-21 16:26:01
貌似你的目的蛋白就没有表达,纯化的不是目的蛋白!

是啊,我的目的蛋白没有那么大,纯化的这个不知道是什么
4楼2013-03-21 19:16:53
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