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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切产物能直接做连接反应吗
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hylee103

金虫 (正式写手)

[求助] 酶切产物能直接做连接反应吗

酶切产物，不做胶回收，直接做连接反应，是否可行？
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1楼 2013-03-21 08:25:40
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xy656691

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-03-21 11:19:55
hylee103: 金币+1, ★有帮助 2013-03-21 14:15:45
hylee103: 金币+1, ★有帮助 2013-07-02 21:57:27
不可行，假阳性太高了。你切开的质粒会重新连在一起的
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2楼2013-03-21 08:43:22
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cucu奶茶

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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hylee103: 金币+1, ★有帮助 2013-03-21 14:15:52
同意二楼的。你得到的转化子不好鉴定是目的片段还是非目的片段。还是得用回收产物做鉴定。
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3楼2013-03-21 09:12:47
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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hylee103: 金币+1, ★有帮助 2013-03-21 14:17:05
hylee103: 金币+1, ★有帮助 2013-07-02 21:57:55
看你怎么切的，柱子可以洗掉和primer大小相仿的DNA（大概60-70bp），来源于pcr得话模板少加点，或者加DpnI一起切都行。
如果一部分来自pcr一部分来自质粒得话可以做去磷酸化，搞清楚原理自己决定好了
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4楼2013-03-21 12:10:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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hylee103: 金币+1, ★有帮助 2013-03-22 14:42:37
如果是从质粒上切下来的不行，片段会连回到原来的载体里。如果是PCR产物是可以的。连接前要把限制性内切酶失活。对于不能加热失活的酶，不要用直接连。
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5楼2013-03-22 02:51:23
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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hylee103: 金币+1 2013-03-22 14:42:47
楼主你不能先纯化一下再连接么？
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keepon
6楼2013-03-22 09:04:18
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