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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么我算出来的酶活那么小呢,都不到1呢 已有2人参与

在一定条件下,每分钟释放出1μmol对硝基苯酚所消耗的酶量定义为1个脂肪酶活力单位(U)。
按下式计算酶活:
X=cV/(tm)        
式中:
X为脂肪酶活力,U•mg-1;c为对硝基苯酚浓度,μmol•mL-1;V为酸碱调节后的反应液终体积,mL;m为酶的质量,mg;t为作用时间,min。
       我根据上面公式计算出来的脂肪酶活力很小,10的-4次方左右的,有哪位知道是哪里出了问题呢?我用的是PNPP法测酶活性,对硝基苯酚浓度C根据标准曲线算出来的,底物与酶液反应后,用碳酸钠溶液萃取,最后体积是10ml,反应时间10min,酶的用量是100微升*15mg/ml=1.5mg
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-21 08:10:15
非常龙齐齐: 金币+1 2013-04-01 15:55:56
我做过淀粉酶、蛋白酶酶活测定,都还不错。我用的是试剂盒,最重要的一点就是要确定最适底物浓度,不知道楼主是否做过预实验来确定一下。
还有,从你的公式来看,我怎么觉得那么别扭呢?请问你用的是比色法吗?或者是滴定法?
这个很灵敏的,低也很正常。还有就是楼主是否注意一下单位有无错误。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

我就是我IamwhatIam
8楼2013-03-20 09:41:30
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★
非常龙齐齐: 金币+2 2013-04-02 16:52:10
引用回帖:
13楼: Originally posted by 非常龙齐齐 at 2013-04-01 15:57:35
我可不可以把公式中酶的用量单位定义成g而不是mg呢?...

要看你测的是什么,脂肪酶的活力一般都不高。比如植食性昆虫,这个酶肯定不会高,都是1以下。酶活力单位可以自己定义的,换成G也可以的。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

我就是我IamwhatIam
14楼2013-04-02 10:27:05
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普通回帖

weebug

版主 (著名写手)


wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-21 08:10:30
有测纯度吗?
天蓝蓝兮日头晒
2楼2013-03-19 13:03:40
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weebug

版主 (著名写手)

有测纯度吗?
天蓝蓝兮日头晒
3楼2013-03-19 13:05:18
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2013-03-19 13:05:18
有测纯度吗?

什么纯度啊?我的酶是自己用酶粉配的
4楼2013-03-19 13:53:28
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weebug

版主 (著名写手)

喔,有没优化的温度,底物浓度,酶浓度呢?
天蓝蓝兮日头晒
5楼2013-03-19 17:04:53
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2013-03-19 17:04:53
喔,有没优化的温度,底物浓度,酶浓度呢?

35℃,酶浓度15mg/ml,底物浓度1.8微摩尔/ml
6楼2013-03-19 17:09:22
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weebug

版主 (著名写手)

从文献,查了酶的极佳状态吗?
天蓝蓝兮日头晒
7楼2013-03-19 21:12:01
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 幽幽深谷竹 at 2013-03-20 09:41:30
我做过淀粉酶、蛋白酶酶活测定,都还不错。我用的是试剂盒,最重要的一点就是要确定最适底物浓度,不知道楼主是否做过预实验来确定一下。
还有,从你的公式来看,我怎么觉得那么别扭呢?请问你用的是比色法吗?或者 ...

做过最适底物浓度的实验,确定了最适浓度了。我用的比色法。单位我看了好多遍了,没错误啊
9楼2013-03-20 10:49:07
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

引用回帖:
9楼: Originally posted by 非常龙齐齐 at 2013-03-20 10:49:07
做过最适底物浓度的实验,确定了最适浓度了。我用的比色法。单位我看了好多遍了,没错误啊...

比色法应该有吸光度的,你的公式没反映出来呢
我就是我IamwhatIam
10楼2013-03-20 11:44:16
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