应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » Help！酶活性突然变低，找不到原因！
111/2返回列表12下一页
查看: 2530  |  回复: 10
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nancyyazi

铜虫 (小有名气)

[求助] Help！酶活性突然变低，找不到原因！

各位前辈，我的实验是筛菌工作，我好不容易筛到一株蛋白酶活性比较高的细菌，心里很开心。但是在深入研究这株菌的最适pH的时候这株菌出问题了，酶活性突然变得很低很低。又重复做了好几次酶活性实验，还是很低，就在我绝望的时候有一次活性又高起来了。为了排除菌的因素，我把酶活高的发酵液拿来重新涂了平板，长出来单菌落再接种子液和发酵液再测酶活，结果活性又很低很低。我不明白哪里出了问题，都是摇16个小时的种子液，再摇48小时发酵液，药品也一样，菌是我之前筛选得到的，在接种子液之前都划线分离6次以上。但是发酵液离心后菌体沉淀的颜色都不一样，请各位前辈帮我分析分析问题究竟出在哪里呢？
图中沉淀多的是酶活性高的那一次离心得到的，沉淀少的是酶活性低的这一次离心得到的。

发酵液离心



[ Last edited by nancyyazi on 2012-4-20 at 15:23 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-04-20 15:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sanmiancxh

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-20 18:09:57
nancyyazi: 金币+10 2012-04-20 19:24:04
首先，怀疑不纯，或不稳定。或是发酵过程中染菌了。
其次，假设你已经分纯：
第一，你的检测方法应该没问题吧。
第二，你说菌体沉淀颜色不一样，你确定不是存放的时间长，变了颜色？或者是因为生长量不一样，所以看起来有区别？怀疑：因为培养条件有所变化，比如说，培养基的配制，灭菌温度的不同导致营养成分的变化，pH的不同，通气量的不同等等等等，导致你的菌产酶少。
第三，你可以试试监测不同发酵时间的酶活，看看是不是后期下降了，或是还未达到产酶高峰。
最后，这菌一般不会相我上面说的这么脆弱吧？你是产蛋白酶的菌，你试试不加碳源，只用蛋白胨培养试试。你看酶活高不高。
暂时就想到这些。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-04-20 17:49:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上官小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到过这种情况，后来发现是菌变异了，有几次是菌污染导致最后没有酶活性了。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-04-23 11:26:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

nancyyazi

铜虫 (小有名气)
2楼2012-04-20 16:59:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nancyyazi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sanmiancxh at 2012-04-20 17:49:36:
首先，怀疑不纯，或不稳定。或是发酵过程中染菌了。
其次，假设你已经分纯：
第一，你的检测方法应该没问题吧。
第二，你说菌体沉淀颜色不一样，你确定不是存放的时间长，变了颜色？或者是因为生长量不一样，所 ...

嗯，你的好多建议我可以试一试，谢谢你
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-20 19:23:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是胞外酶吧？生物量不同，酶活应该是不一样的（不知道你的酶活怎么折算的？）；种子液质量会引起发酵液生物量变化。另外，检查下酶活检测试剂。
赞一下 回复此楼
职业无分贵贱，做事要有格调
5楼2012-04-21 08:49:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nancyyazi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bigboy2050 at 2012-04-21 08:49:05:
是胞外酶吧？生物量不同，酶活应该是不一样的（不知道你的酶活怎么折算的？）；种子液质量会引起发酵液生物量变化。另外，检查下酶活检测试剂。

种子液，120rpm，28℃振荡培养16h。以2％的接种量接入发酵培养基中，120rpm，28℃振荡培养48h。发酵液 4℃，10000rpm离心10min，取上清液，采用Folin-酚显色法进行蛋白酶活力的测定。
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-21 09:18:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyt7638

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果说你的种子液配方、发酵液配方及发酵条件在试验中从没变过，那应该是你实验过程中菌出现问题了，可能是退化、变异或染菌不纯了，建议用你的原始菌重新复壮来培养，或者重新再筛一次；菌体量的减少应该还是菌种活力下降的原因，建议调整一下培养基配方，碳氮比很关键，还有就是合适的有机氮源，无机氮源配合使用；你的菌是细菌吧？温度、转速、接种量可以再提高一点，发酵液离心6000 r/min够了
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-21 16:24:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妞妈学习

金虫 (正式写手)
我不懂酶这块。请问，利用酶处理废水中的物质可能吗？废水是制药废水，成分比较复杂，会导致酶变性吗？
赞一下 回复此楼
http://shop114463412.taobao.com
8楼2012-04-23 08:17:29
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aoaoshch

木虫 (小有名气)
接种量用体积计算，不太准。用总菌数吧，把OD值折进来计算。刚开始时先用小瓶把条件都摸清楚再往后做。
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-23 11:02:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nancyyazi 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭