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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » 壳聚糖固定化酶，没有活力。求原因
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jinjindow

银虫 (正式写手)

[求助] 壳聚糖固定化酶，没有活力。求原因 已有1人参与

固定方法就是一般的将壳聚糖制备成微球，然后进行固定
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1楼 2011-11-13 12:33:39
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jinjindow

银虫 (正式写手)
称取一定质量的壳聚糖溶于4%的冰醋酸中，用注射器滴加到含有20%NaOH和30%甲醇组成的凝结夜中，壳聚糖载体立即形成均匀的微球，用蒸馏水洗涤至中性后，于pH11.0缓冲液中保存备用。
抽滤上述溶液，所得固体微球置于0.5%的戊二醛溶液中，于30℃恒温振荡器中反应4h，再抽滤，用水和丙酮反复洗涤微球，直至微球上不含游离戊二醛为止。在交联后的微球载体中加入一定量Alcalase2.41碱性蛋白酶溶液，室温下搅动2h，置于4℃冰箱过夜次日离心弃去溶液，水洗除去未固定上的酶溶液后得固定化碱性蛋白酶，置于4℃冰箱中保存。

在这个地方里面就是恒温振荡的时候采用的是搅拌了30分钟左右。固定化是，每克壳聚糖 大概1000个活力单位
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2楼2011-11-13 12:37:25
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guoab12

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

会不会是戊二醛浓度过高
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3楼2011-11-14 21:57:33
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Emmar8139

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
树树8013(金币+1): 四个问题，把楼主都问懵了。请继续关注该求助，食品板块欢迎你常来。 2011-11-16 08:52:51
楼主的固定就是利用壳聚糖吸附酶吧，是不是吸附力不强，固定的少，结果不明显呢？
固定化为什么要再室温搅拌再4度静置？
记得戊二醛是溶于水的，为什么要用丙酮去洗？丙酮微毒，且挥发性强~
采用什么方法确定水洗到没有未固定的酶？
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4楼2011-11-15 22:24:33
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jinjindow

银虫 (正式写手)
你们的意见怎么固定？
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5楼2011-11-15 23:37:18
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cq020118

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lovibond: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-28 13:11:27
1 楼主可以尝试着将戊二醛的浓度降低到0.1%。
2 省掉中间一步。将戊二醛和酶在适合温度条件下一起加入，搅拌2h。搅拌完后不要冷藏过夜，直接过滤，清洗。
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6楼2012-01-04 15:34:28
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dl19871205

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3859757楼: Originally posted by jinjindow at 2011-11-13 12:33:39:
固定方法就是一般的将壳聚糖制备成微球，然后进行固定

朋友，请问一下你现在问题解决了吗，我现在遇到跟你类似的问题，我是用壳聚糖-戊二醛吸附交联法固定β-半乳糖苷酶，但是测固定化酶酶活非常低，不知原因何在。可以私下指点一下吗？
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永不言弃！
7楼2012-03-27 14:55:43
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赖穗0911

新虫 (小有名气)
您好  你用的是吸附酶的方法固定化酶      我之前也做过 用TCA法一直没测出酶活力  请问您您找到原因了么？还有包埋法怎么做固定化酶啊 求指点
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求解答
8楼2014-07-28 16:03:38
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jhoo

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

个人建议你先将蛋白酶与一定量的酪蛋白混合后固定，先用酪蛋白保护蛋白酶，然后再交联。你同时查一下文献尤其是博士和硕士方面的论文借鉴一下。再一个你在测量固定化酶活力时要测定游离酶活力，否则有可能酶已经钝化了，后续就不必要做了。做这个实验一定注意做对照组，还有就是你做对照组时的反应体系与固定化酶体系一致。还有国产的酶活力通常比较低。
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9楼2018-01-28 20:51:04
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