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nancyyazi

铜虫 (小有名气)

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[求助] Help！酶活性突然变低，找不到原因！

各位前辈，我的实验是筛菌工作，我好不容易筛到一株蛋白酶活性比较高的细菌，心里很开心。但是在深入研究这株菌的最适pH的时候这株菌出问题了，酶活性突然变得很低很低。又重复做了好几次酶活性实验，还是很低，就在我绝望的时候有一次活性又高起来了。为了排除菌的因素，我把酶活高的发酵液拿来重新涂了平板，长出来单菌落再接种子液和发酵液再测酶活，结果活性又很低很低。我不明白哪里出了问题，都是摇16个小时的种子液，再摇48小时发酵液，药品也一样，菌是我之前筛选得到的，在接种子液之前都划线分离6次以上。但是发酵液离心后菌体沉淀的颜色都不一样，请各位前辈帮我分析分析问题究竟出在哪里呢？
图中沉淀多的是酶活性高的那一次离心得到的，沉淀少的是酶活性低的这一次离心得到的。

发酵液离心

[ Last edited by nancyyazi on 2012-4-20 at 15:23 ]

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1楼 2012-04-20 15:17:22

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zhangyt7638

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

如果说你的种子液配方、发酵液配方及发酵条件在试验中从没变过，那应该是你实验过程中菌出现问题了，可能是退化、变异或染菌不纯了，建议用你的原始菌重新复壮来培养，或者重新再筛一次；菌体量的减少应该还是菌种活力下降的原因，建议调整一下培养基配方，碳氮比很关键，还有就是合适的有机氮源，无机氮源配合使用；你的菌是细菌吧？温度、转速、接种量可以再提高一点，发酵液离心6000 r/min够了

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7楼2012-04-21 16:24:17

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sanmiancxh

金虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-20 18:09:57
nancyyazi: 金币+10 2012-04-20 19:24:04

首先，怀疑不纯，或不稳定。或是发酵过程中染菌了。
其次，假设你已经分纯：
第一，你的检测方法应该没问题吧。
第二，你说菌体沉淀颜色不一样，你确定不是存放的时间长，变了颜色？或者是因为生长量不一样，所以看起来有区别？怀疑：因为培养条件有所变化，比如说，培养基的配制，灭菌温度的不同导致营养成分的变化，pH的不同，通气量的不同等等等等，导致你的菌产酶少。
第三，你可以试试监测不同发酵时间的酶活，看看是不是后期下降了，或是还未达到产酶高峰。
最后，这菌一般不会相我上面说的这么脆弱吧？你是产蛋白酶的菌，你试试不加碳源，只用蛋白胨培养试试。你看酶活高不高。
暂时就想到这些。

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3楼2012-04-20 17:49:36

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nancyyazi

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引用回帖:

3楼: Originally posted by sanmiancxh at 2012-04-20 17:49:36:
首先，怀疑不纯，或不稳定。或是发酵过程中染菌了。
其次，假设你已经分纯：
第一，你的检测方法应该没问题吧。
第二，你说菌体沉淀颜色不一样，你确定不是存放的时间长，变了颜色？或者是因为生长量不一样，所 ...

嗯，你的好多建议我可以试一试，谢谢你

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4楼2012-04-20 19:23:54

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