| 查看: 3467 | 回复: 10 | |||
[求助]
Help！酶活性突然变低，找不到原因！
|
|||
|
各位前辈，我的实验是筛菌工作，我好不容易筛到一株蛋白酶活性比较高的细菌，心里很开心。但是在深入研究这株菌的最适pH的时候这株菌出问题了，酶活性突然变得很低很低。又重复做了好几次酶活性实验，还是很低，就在我绝望的时候有一次活性又高起来了。为了排除菌的因素，我把酶活高的发酵液拿来重新涂了平板，长出来单菌落再接种子液和发酵液再测酶活，结果活性又很低很低。我不明白哪里出了问题，都是摇16个小时的种子液，再摇48小时发酵液，药品也一样，菌是我之前筛选得到的，在接种子液之前都划线分离6次以上。但是发酵液离心后菌体沉淀的颜色都不一样，请各位前辈帮我分析分析问题究竟出在哪里呢？ 图中沉淀多的是酶活性高的那一次离心得到的，沉淀少的是酶活性低的这一次离心得到的。  发酵液离心 [ Last edited by nancyyazi on 2012-4-20 at 15:23 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 生工检测理论与实务 |
» 猜你喜欢
极限拉扯，如何抉择
已经有14人回复
-
申请科研项目纯靠实力能成功吗？
已经有6人回复
-
OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？
已经有12人回复
-
课题组会帮你通过考核么？
已经有7人回复
-
入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶活性检测如何让进行
已经有4人回复
- 有没有会做啊 ？我想死的心都有了啊。。。DNA酶切模拟软件。基因三维结构观察等等
已经有3人回复
- 如何计算发酵培养基中的碳氮比
已经有9人回复
- 9.0kb载体与2.4kb片段为什么用T4连接酶连接，没有得到阳性克隆？
已经有7人回复
- 请教一个发酵种子液染菌的问题
已经有13人回复
- 发酵产酶必看，急急急急！！！！
已经有17人回复
- 比较不同细菌发酵能力时的接种量问题
已经有6人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- 菌体酶活的降低
已经有4人回复
- 细菌产的酶都是胞外酶吗？
已经有6人回复
- 为什么我算出来的酶活那么小呢，都不到1呢
已经有26人回复
- 测定蛋白酶活性的方法
已经有5人回复
- 微生物生长最适ph的确定
已经有5人回复
- 双酶切没有切开，怎么回事啊
已经有6人回复
- 如何取发酵液测酶活
已经有12人回复
- 有关碳氮比问题
已经有3人回复
- 壳聚糖固定化酶，没有活力。求原因
已经有8人回复
- 氨基重氮化后产率低，原因找不到
已经有9人回复
- 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？
已经有9人回复
- 【求助/交流】碳氮比问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】怎么测鲨烯合酶、鲨烯环氧酶的含量和活性
已经有5人回复
- 【求助/交流】测定酶活的时候，多长时间记一次吸光度？需要记几分钟？ 怎么计算酶活�
已经有3人回复
- 【求助】测细胞活性时，IC50和EC50有什么区别
已经有6人回复
sanmiancxh
金虫 (初入文坛)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1507.8
- 帖子: 45
- 在线: 52.6小时
- 虫号: 1313731
- 注册: 2011-06-02
- 专业: 微生物遗传育种学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-20 18:09:57
nancyyazi: 金币+10 2012-04-20 19:24:04
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-20 18:09:57
nancyyazi: 金币+10 2012-04-20 19:24:04
|
首先，怀疑不纯，或不稳定。或是发酵过程中染菌了。 其次，假设你已经分纯： 第一，你的检测方法应该没问题吧。 第二，你说菌体沉淀颜色不一样，你确定不是存放的时间长，变了颜色？或者是因为生长量不一样，所以看起来有区别？怀疑：因为培养条件有所变化，比如说，培养基的配制，灭菌温度的不同导致营养成分的变化，pH的不同，通气量的不同等等等等，导致你的菌产酶少。 第三，你可以试试监测不同发酵时间的酶活，看看是不是后期下降了，或是还未达到产酶高峰。 最后，这菌一般不会相我上面说的这么脆弱吧？你是产蛋白酶的菌，你试试不加碳源，只用蛋白胨培养试试。你看酶活高不高。 暂时就想到这些。 |
3楼2012-04-20 17:49:36
10楼2012-04-23 11:26:57
 |
2楼2012-04-20 16:59:42
4楼2012-04-20 19:23:54
bigboy2050
铜虫 (小有名气)
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 650.3
- 红花: 2
- 帖子: 163
- 在线: 277.4小时
- 虫号: 1374939
- 注册: 2011-08-21
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-04-21 08:49:05
6楼2012-04-21 09:18:57
zhangyt7638
木虫 (著名写手)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 3256
- 散金: 200
- 红花: 2
- 帖子: 1085
- 在线: 544.7小时
- 虫号: 731064
- 注册: 2009-03-25
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
7楼2012-04-21 16:24:17
妞妈学习
金虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1762.6
- 散金: 85
- 帖子: 897
- 在线: 204.8小时
- 虫号: 1392857
- 注册: 2011-09-06
- 性别: MM
- 专业: 污染控制化学
8楼2012-04-23 08:17:29
aoaoshch
木虫 (小有名气)
- MicEPI: 1
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 2646.2
- 红花: 3
- 帖子: 153
- 在线: 105小时
- 虫号: 800123
- 注册: 2009-06-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
9楼2012-04-23 11:02:06
200