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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 里氏木霉在10L发酵罐发酵检测不到酶活
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

[求助] 里氏木霉在10L发酵罐发酵检测不到酶活

最近在做发酵罐的实验，但发酵罐上做却检测不到酶活。我做的是里氏木霉产木聚糖酶，是一种丝状真菌。培养基的配方已经在摇瓶上优化好，并且在摇瓶里的酶活已经非常可观。在摇瓶里基本上发酵24h就能检测到酶活，48h后酶活就已经很明显了，最大酶活出现在第5天左右。
     但悲剧的是我按照摇瓶的配方放大到30L发酵罐上（装液量10L）到现在已经50多小时了却几乎检测不到酶活，悲催的是这已经是第二罐了，两罐都是这样一直检测不到酶活，但菌体生长却很丰富。
      与摇瓶不同的是，在罐上做的时候我加入了消泡剂GPE（添加量5ml/L），不知道是不是消泡剂的影响呢？
      还有一个很重要的东西就是溶氧，在种子液接入罐中后几小时后溶氧迅速下降至0.2%左右，然后一直维持这个数值，到现在已经50多个小时，溶氧似乎有回升迹象（已经到1.0%左右），我的通风量是10L/min，是不是这个通风量小了的缘故。

     望各位做发酵的高手支招啊，小弟在线等，感激不尽啊！
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一起学习，一起进步
1楼 2013-01-16 21:42:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-01-17 21:36:32
通气量增大，降低搅拌速度，如果发酵气泡不是非常严重，一致影响发酵那就最好别加消泡剂，或者小量加分批加，看看有没有改善。不应该发生这样的事情啊 。
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2楼2013-01-17 08:26:04
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war3one

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-19 21:16:01
可能培养基中含有大量固体不容物，罐子不能把它搅拌均匀，菌体都在液体中生长啦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2013-01-19 18:41:55
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普通回帖

lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-01-17 21:36:44
huangrui5036: 金币+50, ★★★很有帮助, 问题基本上已经解决了 2013-03-14 19:05:46
看来是你控制条件不好，调节通气和转速，让溶氧保持一定水平，不要生长太快或者太慢。还有你的消泡剂量怎么那么多啊，我们一般30L才加5ml，消泡剂对菌体生长是有毒性的。而且你发酵罐肯定比摇瓶培养量大了，可能得多培养会儿才会有酶活。要多试几次，摸一下发酵罐的培养条件。
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3楼2013-01-17 09:23:46
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huangrui5036

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lihao1988903 at 2013-01-17 09:23:46
看来是你控制条件不好，调节通气和转速，让溶氧保持一定水平，不要生长太快或者太慢。还有你的消泡剂量怎么那么多啊，我们一般30L才加5ml，消泡剂对菌体生长是有毒性的。而且你发酵罐肯定比摇瓶培养量大了，可能得多 ...

是将通气量和转速同时加大吗？通气量调到25L/min怎么样？转速我不敢调大啊，我怕菌体承受不了那么大的剪切力。您怎么看？
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4楼2013-01-17 14:59:19
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huangrui5036

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lihao1988903 at 2013-01-17 09:23:46
看来是你控制条件不好，调节通气和转速，让溶氧保持一定水平，不要生长太快或者太慢。还有你的消泡剂量怎么那么多啊，我们一般30L才加5ml，消泡剂对菌体生长是有毒性的。而且你发酵罐肯定比摇瓶培养量大了，可能得多 ...

不好意思，我写错了，消泡剂的添加量是0.5mL/L，这个添加量算多吗？到今天为止已经发酵80多小时了，还是没检测到酶活。
    我把通风量从10L/min加到20L/min，溶氧可以维持在45%~50%之间，不知道到明天早上会不会跌零。
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5楼2013-01-17 20:32:08
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huangrui5036

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biolio2009 at 2013-01-17 08:26:04
通气量增大，降低搅拌速度，如果发酵气泡不是非常严重，一致影响发酵那就最好别加消泡剂，或者小量加分批加，看看有没有改善。不应该发生这样的事情啊 。

不好意思，我写错了，消泡剂的添加量是0.5mL/L，这个添加量算多吗？到今天为止已经发酵80多小时了，还是没检测到酶活。
    我把通风量从10L/min加到20L/min，溶氧可以维持在45%~50%之间，不知道到明天早上会不会跌零。
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6楼2013-01-17 20:32:20
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博ai

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, good 2013-01-19 21:15:54
溶氧都掉到0.2%的，肯定会严重影响产酶的，试着搅拌转数提高吧，通气量10L/min够了。30L的发酵罐，对于霉菌，打到500rpm都没问题的，而且较高数的搅拌，霉菌会形成菌球，可能会对产酶有帮助。另外，你从初始就要保证足够的溶氧，几十小时以后再调节估计没什么效果，菌体在低溶氧状态下，相关合成酶系可能发生不可逆的变化。
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7楼2013-01-18 16:22:48
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huangrui5036

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 博ai at 2013-01-18 16:22:48
溶氧都掉到0.2%的，肯定会严重影响产酶的，试着搅拌转数提高吧，通气量10L/min够了。30L的发酵罐，对于霉菌，打到500rpm都没问题的，而且较高数的搅拌，霉菌会形成菌球，可能会对产酶有帮助。另外，你从初始就要保证 ...

第4天的时候我把通气量调到20L/min，转速没有变，之后溶氧维持在50%左右，维持了几小时后便开始上升，然后开始检测到酶活了，而且酶活上升得还比较快，搅拌我不敢开大了，因为我在做摇瓶的时候发现这个菌种对剪切力很敏感。再来一罐试试吧，呵呵，感谢赐教。
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9楼2013-01-21 19:33:13
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感觉搅拌速度有点高了。
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蓝精灵
10楼2013-01-21 20:11:39
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